[发明专利]一种野生桑树桑黄菌种分离纯化方法

说明书

本发明公开了一种野生桑树桑黄菌种分离纯化方法，涉及桑黄菌培育技术领域，桑黄菌的生长速度快，分离周期短的优点，具体方案为：包括以下步骤：S1：在无菌条件下，对桑黄子实体进行表面消毒；S2：在桑黄子实体上切下菌块，移接到平板培养基上，黑暗条件下培养；S3：观察桑黄的生长情况，发现有嫩黄色或者深黄色菌丝，通过接种环挑取，在新培养基上采用四区平板划线法分离，继续培养；S4：出现杂菌时进行判断，当杂菌影响桑黄菌的生长，重复S3步骤；当杂菌不影响桑黄菌的生长，在无菌条件下将杂菌去除，直至得到纯化桑黄菌；本发明提供的培养基与传统的广谱型培养基相比，不易染杂菌，且可抗杂菌。

技术领域

本发明涉及桑黄菌培育技术领域，更具体地说，它涉及一种野生桑树桑黄菌种分离纯化方法。

背景技术

桑黄是寄生于桑树上的一种珍稀药用真菌，具有很高医疗和保健功效，《神农本草经》、《本草纲目》、《本经逢原》等均有详细记载。现代医学研究表明，桑黄含有多糖类、黄酮类、三萜类等活性成分，有提高免疫力、抗氧化抗衰老、防癌抗癌、养肝护肝、治疗前列腺和痛风等功效。是目前国际公认的使用免疫疗法生物治癌领域中效率最高的真菌，已成为国内外医药制剂与保健品行业研发的热点。1968年日本学者临床实验发现桑黄抑制肿瘤率高达96.7％，且无毒、副作用；2006年美国波士顿大学学者研究证实桑黄有助于缓解多种顽症；英国学者研究结果桑黄配搭化疗药物治疗人体肿瘤可以大大提高肿瘤细胞凋亡率，韩国卫生部1993年批准桑黄为抗癌药物；美国已研发桑黄抗癌药品；中国医学科学院、安徽医科大学等科研机构对桑黄药理做了大量研究，发现桑黄提取物能显著抑制肿瘤生长和转移。

野生桑黄数量稀少，人工栽培的桑黄产量及品质不高，无法满足市场需求。人工栽培的桑黄产量及品质不高，最根本原因是桑黄菌种退化，生长活力较差。野生桑树桑黄生命力强，适应力好，因此分离纯化出野生桑树桑黄菌种作为人工栽培的桑黄母种对于后续的科研及生产有着十分重要的意义，然而分离纯化工作往往因缺乏合适的培养基，出现大量杂菌，目的菌种桑黄生长速度较慢，抗杂菌能力差，通过一次或二次试验很难获得桑黄纯菌落，需要反复试验，导致分离纯化周期需要花费3-6个月的时间，阻碍了人工栽培桑黄的规模化和产业化进程。为了解决上述问题，本发明提供了一种桑树桑黄菌种分离纯化专用培养基的制备方法，解决了桑黄菌种活力差，易染杂菌，分离纯化周期长的问题。

发明内容

为解决上述技术问题，本发明提供一种野生桑树桑黄菌种分离纯化方法，桑黄菌的生长速度快，分离周期短的优点。

本发明的上述技术目的是通过以下技术方案得以实现的：

一种野生桑树桑黄菌种分离纯化方法，包括以下步骤：

S1：在无菌条件下，对桑黄子实体进行表面消毒；

S2：在桑黄子实体上切下菌块，移接到平板培养基上，黑暗条件下培养；

S3：观察桑黄的生长情况，发现有嫩黄色或者深黄色菌丝，通过接种环挑取，在新培养基上采用四区平板划线法分离，继续培养；

S4：出现杂菌时进行判断，当杂菌影响桑黄菌的生长，重复S3步骤；当杂菌不影响桑黄菌的生长，在无菌条件下将杂菌去除，直至得到纯化桑黄菌；

S2步骤中，平板培养基的组分配比为马铃薯滤液80-180ml、麦芽糖15-30g、蛋白胨0.5-3g、硫酸镁0.5-3g、磷酸二氢钾1-5g、VB10.005-0.025g、琼脂10-20g、桑枝及桑叶过滤水0.5-1.5L、pH为6.1-6.3。

作为一种优选方案，S2过程中，使用酒精擦拭并灼烧的解剖刀，冷却后在桑黄子实体上切去长宽高为1cm*1cm*1cm，尺寸大小上下浮动20％。

作为一种优选方案，S2过程中，在平板培养基上的培养条件为温度20-25℃，湿度50-60％；第一天倒置平板培养基培养，第一天之后正放平板培养基培养。