[发明专利]一种基于超声波的核酸提取方法

说明书

本发明提供了一种基于超声波的核酸提取方法，所述核酸提取方法包括：将待测样本、化学裂解液、蛋白酶K和磁珠悬液放入反应容器内，在超声波的作用下进行样本裂解，随后进行核酸纯化，最后通过超声波处理和/或高温处理进行核酸洗脱。本发明提供的核酸提取方法采用超声法配合化学裂解液及蛋白酶K同时作用于样本，有效提高裂解效率，可以在常温下30～60s内完成样本裂解。本发明提供的核酸提取方法采用超声法配合化学裂解液及蛋白酶K同时作用于样本，有效提高裂解效率，可以在常温下30～60s内完成细胞、微生物等样本裂解。

技术领域

本发明属于核酸提取技术领域，涉及一种基于超声波的核酸提取方法。

背景技术

核酸包括DNA、RNA两种分子，以核酸为研究对象的生物技术，包括对核酸的提取、克隆、扩增、检测、测序等一系列技术，近年来飞速发展，这些技术目前不仅在研究单位使用，而且在社会生活中多个职能部门已经广泛应用。而核酸研究的第一步，就是从各种生物样本中提取核酸，核酸提取的效率成为下游核酸研究能否成功的制约因素。核酸在细胞中都是以与蛋白质结合的状态存在，核酸提取的主要步骤为：裂解细胞去除与核酸结合的蛋白质以及多糖、脂类等生物大分子，并纯化核酸，去除盐类和有机化学试剂等杂质。

目前主要采用的核酸提取方法包括离心柱法和磁珠法。其中，磁珠法是以微米磁珠为载体的一种核酸提取技术，核酸分子可与磁珠表面的硅羟基发生特异性识别与结合，在外部磁场的作用下发生聚集或分散，从而进行核酸分离纯化。目前，对于核酸的提取，磁珠法一般包括裂解、结合、洗涤和洗脱四个主要步骤，每一步骤又可由多种不同的方法单独或联合实现。

CN108410859A公开了一种核酸提取方法，包括裂解步骤和转移步骤，裂解步骤包括样本的热裂解和磁珠吸附热裂解释放的核酸，裂解步骤在裂解区域完成；将吸附有核酸的磁珠转移到前处理液中、完成转移步骤；前处理液位于前处理区域，裂解区域与前处理区域相互独立。

CN101085799公开了一种核酸提取方法，该方法包括以下步骤：(a)将生物材料与裂解液接触从而释放出核酸；(b)将水溶性有机溶剂加入到含有核酸的溶液中从而得到裂解物溶液；(c)将裂解物溶液与固体材料接触从而使得核酸被吸附到固体材料上；(d)用洗涤液洗掉固体材料上的杂质，其中，实施两次或多次洗涤程序，并且在两次或多次洗涤程序中，除了第一洗涤程序以外的至少一次洗涤程序中所用的洗涤液所形成的液面高于第一洗涤程序中所用的洗涤液所形成的液面；以及(e)用回收液使吸附到固体材料上的核酸解吸附。

CN113201529A公开了一种核酸提取方法，包括：S101、将样本与裂解液混合，使样本充分裂解；S103、在S101得到的溶液中加入磁珠，使得磁珠与样本裂解出来的核酸结合；S105、磁棒移动至磁棒套内后，整体向下移动，进入溶液中吸附磁珠；吸附完成后，磁棒和磁棒套保持相对位置不动，上下振荡若干次；S107、将磁珠转移至清洗液中，磁棒套上下振荡使得磁珠均匀分散于清洗液，洗去附着在磁珠表面的、除核酸以外的物质；S109、利用磁棒将清洗完成的磁珠吸附于磁棒套外表面，并对磁珠和磁棒套进行干燥处理；S111、将干燥后的磁珠转移至洗脱液中进行洗脱，附着在磁珠上的核酸脱离磁珠进入洗脱液中，利用磁棒和磁棒套将溶液中的磁珠吸附回收，即得核酸溶液。

由于核酸提取的重要地位，很多研究学者开发了一系列的核酸提取方法，包括用酚/氯仿等有机溶剂抽提的传统方法、操作简便但核酸纯度低的螯合树脂法、玻璃粉吸附法、硅胶膜吸附柱法、抗核酸单克隆抗体的免疫亲和法、自动化平台广泛应用的磁珠法等等。目前的核酸提取方法还存在着核酸提取过程复杂、核酸纯度低等缺陷。

发明内容

针对现有技术存在的不足，本发明的目的在于提供一种基于超声波的核酸提取方法，本发明提供的核酸提取方法采用超声法配合化学裂解液及蛋白酶K同时作用于样本，有效提高裂解效率，可以在常温下30～60s内完成样本裂解。

为达此目的，本发明采用以下技术方案：