[发明专利]一种基于超声波的核酸提取方法

权利要求书

1.一种基于超声波的核酸提取方法，其特征在于，所述核酸提取方法包括：将待测样本、化学裂解液、蛋白酶K和磁珠悬液放入反应容器内，在超声波的作用下进行样本裂解，随后进行核酸纯化，最后通过超声波处理和/或高温处理进行核酸洗脱。

2.根据权利要求1所述的核酸提取方法，其特征在于，所述化学裂解液包括钠盐、蛋白变性剂、金属离子络合剂、表面活性剂和醇；

优选地，所述钠盐包括醋酸钠；

优选地，所述钠盐的摩尔浓度为0.5～2mol/L；

优选地，所述蛋白变性剂包括胍盐和/或尿素；

优选地，所述胍盐包括盐酸胍；

优选地，所述蛋白变性剂的摩尔浓度为2～5mol/L；

优选地，所述金属离子络合剂包括EDTA；

优选地，所述金属离子络合剂的摩尔浓度为1～5mol/L；

优选地，所述表面活性剂包括十二烷基肌氨酸钠、十二烷基苯磺酸钠、十六烷基三甲基溴化铵、曲拉通X-100或吐温20中的任意一种或至少两种的组合；

优选地，所述表面活性剂的体积浓度为0.25～1vol％；

优选地，所述醇包括乙醇、聚乙二醇或异丙醇中的任意一种或至少两种的组合；

优选地，所述醇的体积分数为40～60vol％；

优选地，所述化学裂解液的pH值控制在7～7.5，进一步优选为7.4。

3.根据权利要求1或2所述的核酸提取方法，其特征在于，所述样本裂解过程中采用的超声波的超声功率为0～15W且不为0，优选为10W；

优选地，所述样本裂解过程中采用的超声波的超声频率为10～30kHz，进一步优选为18～25kHz；

优选地，所述样本裂解过程中的超声波处理时间为1～4min。

4.根据权利要求1-3任一项所述的核酸提取方法，其特征在于，所述核酸纯化过程包括：

样本裂解完成后，对反应容器中的反应体系聚磁，使得裂解后的核酸吸附于磁珠表面，吸去上清液后，向反应容器内依次加入蛋白漂洗液和清洗液，对磁珠表面吸附的核酸进行漂洗和清洗。

5.根据权利要求1-4任一项所述的核酸提取方法，其特征在于，所述蛋白漂洗液包括吗啉丙磺酸、氯化钠和聚乙二醇；

优选地，所述吗啉丙磺酸的摩尔浓度为5～25mmol/L，进一步优选为10mmol/L；

优选地，所述氯化钠的摩尔浓度为150～200mmol/L，进一步优选为180mmol/L；

优选地，所述聚乙二醇的体积分数为1～10vol％。

6.根据权利要求1-5任一项所述的核酸提取方法，其特征在于，所述清洗液为50～80vol％的乙醇溶液，进一步优选为75vol％的乙醇溶液。

7.根据权利要求1-6任一项所述的核酸提取方法，其特征在于，加入蛋白漂洗液对核酸进行漂洗后，对反应溶液依次进行超声和聚磁，随后弃去上清液，再向反应容器内加入所述清洗液进行清洗；

优选地，所述清洗过程进行至少一次；

优选地，每次清洗结束后，对反应溶液依次进行超声和聚磁，随后弃去上清液，再向反应容器内加入清洗液，进行下一次清洗操作；

优选地，最后一次清洗结束后，对反应溶液进行除醇，随后进行核酸洗脱。

8.根据权利要求1-7任一项所述的核酸提取方法，其特征在于，所述核酸洗脱过程包括：

核酸纯化后，向反应容器内加入洗脱液，在超声波和/或高温的作用下，将磁珠表面吸附的核酸洗脱下来。

9.根据权利要求1-8任一项所述的核酸提取方法，其特征在于，所述洗脱液包括缓冲液和络合剂；

优选地，所述洗脱液的pH值控制在7～9，进一步优选为8。

10.根据权利要求1-9任一项所述的核酸提取方法，其特征在于，所述核酸洗脱过程中采用的超声波的超声功率小于样本裂解过程中采用的超声波的超声功率；

优选地，所述核酸洗脱过程中采用的超声波的超声功率为1～10W，优选为5W；

优选地，所述核酸洗脱过程中的超声时间为1～5min；

优选地，所述高温处理的加热温度为50～70℃，进一步优选为60℃；

优选地，所述高温处理的加热时间为5～20min，进一步优选为10～15min；

优选地，在核酸洗脱过程中，所述超声波处理方式为间歇式超声。