[发明专利]一种外周血NKT细胞培养液及培养方法

权利要求书

1.一种外周血NKT细胞培养液，其特征在于，该细胞培养液包括含10v/v%自体血清的淋巴细胞无血清培养基，在该培养基中添加细胞因子：1000IU/ml的IL-2、50ng/ml 的IL-15、50ng/ml的IL-18、200ng/ml 的CD3 单克隆抗体、2ng/ml的达沙替尼及100IU/ml的2-（噻唑-2-基氨基)亚乙基一1,1一双膦酸四特戊酰氧基甲基酯。

2.一种外周血NKT细胞的培养方法，其特征在于，包括以下步骤：

S1、第0天，从外周血中分离出单个核细胞，将所述单个核细胞加入含10v/v%自体血清的淋巴细胞无血清培养基中，并往该培养基中添加细胞因子，所述细胞因子包括浓度为1000IU/ml的IL-2、浓度为50ng/ml 的IL-15、浓度为50ng/ml 的IL-18、浓度为200ng/ml 的CD3 单克隆抗体、浓度为2ng/ml的达沙替尼及浓度为100IU/ml 的2-（噻唑-2-基氨基)亚乙基一1,1一双膦酸四特戊酰氧基甲基酯；

S2、第3和第5天，分别添加淋巴细胞无血清培养基以及细胞因子，所述细胞因子包括浓度为1000IU/ml的IL-2、浓度为300ng/ml 的IL-15、浓度为300ng/ml 的IL-18、浓度为500ng/ml 的CD3 单克隆抗体、浓度为2ng/ml的达沙替尼及浓度为300IU/ml 的2-（噻唑-2-基氨基)亚乙基一1,1一双膦酸四特戊酰氧基甲基酯；

S3、第7天、第9天、第11天，分别添加淋巴细胞无血清培养基以及浓度为1000IU/ml的IL-2细胞因子；

S4、第14天，停止培养，细胞培养结束后，将培养好的NKT细胞转移到离心管中进行离心处理后，收集NKT细胞并用0.9%的氯化钠溶液反复洗涤2~3次；

S5、往步骤S4的洗涤后获得的NKT细胞中加入人血清白蛋白，并用0.9%的氯化钠溶液定容，得到所述外周血NKT细胞。

3.根据权利要求2所述的培养方法，其特征在于，所述淋巴细胞无血清培养基为GT-T551 H3培养基、CorningKBM581淋巴细胞无血清培养基或RPMI-1640培养基中的任一种。

4.根据权利要求2所述的培养方法，其特征在于，细胞培养过程中，细胞浓度控制在1×10⁷个/ml~2×10⁷个/ml。

5.根据权利要求2所述的培养方法，其特征在于，步骤S5中，向外周血NKT细胞中加入体积百分比为10％的人血清白蛋白10 ml，并用0.9%的氯化钠溶液定容至200ml。