[发明专利]一种检测ApoE单核苷酸多态性的方法

权利要求书

1.一种检测ApoE单核苷酸多态性的方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：

(1)将待检测标本的DNA模板，以及序列如SEQ ID NO.1的引物F1，序列如SEQ ID NO.11的引物F2，序列如SEQ ID NO.12的引物F3，序列如SEQ ID NO.2的引物R1，序列如SEQ IDNO.13的引物R2，序列如SEQ ID NO.14的引物R3，序列如SEQ ID NO.19的探针P13，序列如SEQ ID NO.20的探针P14，序列如SEQ ID NO.21的探针P15，序列如SEQ ID NO.22的探针P16放置于PCR扩增体系内；

(2)对步骤(1)获得的PCR扩增体系进行PCR扩增；

(3)检测步骤(2)所述的PCR扩增的扩增产物。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，在步骤(1)所述探针P13、探针P14、探针P15和探针P16的5’端分别被标记产生不同荧光信号的荧光基团，在所述探针的3’端标记荧光淬灭基团，步骤(3)所述检测为荧光定量检测。

3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，以荧光基团FAM标记探针P13的5’端，以荧光基团HEX标记探针P14的5’端，以荧光基团ROX标记探针P15的5’端，以荧光基团Cy5标记探针P16的5’端。

4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，以荧光淬灭基团MGB标记所述探针P13、探针P14、探针P15和探针P16的3’端。

5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，步骤(3)所述的检测的Ct值设定为25～35。

6.根据权利要求1-5任一所述的方法，其特征在于，步骤(2)所述的PCR扩增的扩增条件为预变性：95℃，10分钟，1个循环；变性：95℃，30秒，退火：60℃，75秒，55个循环。

7.一种应用权利要求1-5任一所述的方法检测ApoE单核苷酸多态性的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括：序列如SEQ ID NO.1的引物F1，序列如SEQ ID NO.11的引物F2，序列如SEQ ID NO.12的引物F3，序列如SEQ ID NO.2的引物R1，序列如SEQ ID NO.13的引物R2，序列如SEQ ID NO.14的引物R3，序列如SEQ ID NO.19的探针P13，序列如SEQ ID NO.20的探针P14，序列如SEQ ID NO.21的探针P15，序列如SEQ ID NO.22的探针P16。

8.根据权利要求7所述的试剂盒，其特征在于，在所述探针P13、探针P14、探针P15和探针P16的5’端分别被标记产生不同荧光信号的荧光基团，在所述探针P13、探针P14、探针P15和探针P16的3’端标记荧光淬灭基团。

9.根据权利要求8所述的试剂盒，其特征在于，以荧光基团FAM标记探针P13的5’端，以荧光基团HEX标记探针P14的5’端，以荧光基团ROX标记探针P15的5’端，以荧光基团Cy5标记探针P16的5’端。

10.根据权利要求8所述的试剂盒，其特征在于，以荧光淬灭基团MGB标记所述探针P13、探针P14、探针P15和探针P16的3’端。