[发明专利]一种生产樱桃苷的重组酵母工程菌株及应用

权利要求书

1.一株可合成樱桃苷的酿酒酵母，其特征在于，以含有柚皮素合成途径的酿酒酵母E32为出发菌株，表达了核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示的来源于Arabidopsis thaliana的葡萄糖基转移酶基因UGT73C6，其替换酿酒酵母基因组上的EXG1基因，还进行了如下改进：

（1）敲除了酿酒酵母内源糖苷水解酶基因SPR1；

（2）过量表达酿酒酵母内源基因PGM1、UGP1、URA6和YNK1；

（3）引入了异源蔗糖磷酸化酶途径基因galU；

（4）过量表达莽草酸途径基因ARO1、ARO2、ARO3和aroL；其中，基因PGM1、UGP1、URA6和YNK1的核苷酸序列分别如SEQ ID NO.2、SEQ ID NO.3、SEQ ID NO.4和SEQ ID NO.5所示，基因galU的核苷酸序列如SEQ ID NO.6所示，基因ARO1、ARO2、ARO3和aroL的核苷酸序列分别如SEQ ID NO.7、SEQ ID NO.8、SEQ ID NO.9和SEQ ID NO.10所示。

2.根据权利要求1所述的酿酒酵母，其特征在于，利用启动子P_CCW12起始UGT73C6基因表达。

3.根据权利要求1或2所述的酿酒酵母，其特征在于，用启动子P_TDH3起始PGM1基因的表达；用启动子P_PGK1起始UGP1基因的表达；用启动子P_FBA1起始URA6基因的表达；用启动子P_ENO2起始YNK1基因的表达；用启动子P_TDH3起始galU基因的表达。

4.一种生产樱桃苷的方法，其特征在于，应用权利要求1~3任一所述的酿酒酵母发酵，收集发酵液中的樱桃苷；所述发酵是将所述酿酒酵母接种于YPD培养基中，于25~30℃发酵至少72 h。

5.权利要求1~3任一所述的酿酒酵母或权利要求4所述方法在生产樱桃苷或含樱桃苷的产品中的应用。