[发明专利]S100A4蛋白在动脉粥样硬化性肾动脉狭窄诊断中的应用

权利要求书

1.S100A4基因或其编码蛋白作为生物标志物在制备诊断动脉粥样硬化性肾动脉狭窄的试剂盒中的应用。

2.根据权利要求1所述的S100A4基因或其编码蛋白作为生物标志物在制备诊断动脉粥样硬化性肾动脉狭窄的试剂盒中的应用，其特征在于，所述试剂盒通过逆转录PCR、实时定量PCR或蛋白免疫检测试剂盒检测样本中S100A4基因或其编码蛋白的表达水平。

3.根据权利要求1所述的S100A4基因或其编码蛋白作为生物标志物在制备诊断动脉粥样硬化性肾动脉狭窄的试剂盒中的应用，其特征在于，所述逆转录PCR和/或实时定量PCR检测试剂盒包括SEQ ID NO .3-SEQ ID NO .4所示的扩增S100A4基因的引物。

4.根据权利要求1所述的S100A4基因或其编码蛋白作为生物标志物在制备诊断动脉粥样硬化性肾动脉狭窄的试剂盒中的应用，其特征在于，所述蛋白免疫检测试剂盒包括与S100A4蛋白特异性结合的抗体。

5.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，所述样本为血浆血和/或外周血单个核细胞。

6.根据权利要求1所述的S100A4基因或其编码蛋白作为生物标志物在制备诊断动脉粥样硬化性肾动脉狭窄的试剂盒中的应用，其特征在于，所述S100A4基因的核苷酸序列如SEQ.ID.NO.1所示。

7.根据权利要求1所述的S100A4基因或其编码蛋白作为生物标志物在制备诊断动脉粥样硬化性肾动脉狭窄的试剂盒中的应用，其特征在于，所述S100A4蛋白的氨基酸序列如SEQ.ID.NO.2所示。

8.S100A4基因或其编码蛋白作为生物标志物在制备诊断动脉粥样硬化性肾动脉狭窄的试剂盒中的应用，其特征在于，所述S100A4基因荧光定量检测试剂盒的使用方法包括以下步骤：

步骤1、收集外周血单个核细胞；

步骤2、提取外周血单个核细胞RNA；

步骤3、将抽提出的RNA反转录成对应的cDNA；

步骤4、将反转录后的cDNA进行对S100A4和GAPDH基因的荧光定量PCR扩增；

步骤5、以GAPDH作为内参，记录每个反应的Ct值，以2^-△CT的方式表示人外周血单个核细胞中的S100A4的表达量，△CT为目标S100A4与参照GAPDH的CT值之差。

9.S100A4基因或其编码蛋白作为生物标志物在制备诊断动脉粥样硬化性肾动脉狭窄的试剂盒中的应用，其特征在于，所述S100A4蛋白检测试剂盒的使用方法包括以下步骤：

步骤1、分离收集血浆样品；

步骤2、测定血浆中S100A4浓度；

步骤3、绘制S100A4标准曲线；

步骤4、根据步骤3中绘制的S100A4标准曲线，以及步骤2中待检样品稀释倍数及待检样品测定的OD值，可以计算待检测样品的浓度；同时绘制S100A4的ROC曲线，计算曲线下面积，同时将待检测样品的浓度与临界值浓度进行比较。

10.根据权利要求9所述的应用，其特征在于，所述步骤4中曲线下面积作为判断检测结果敏感性和特异性的指标；所述临界值浓度为369.59 pg/mL。