[发明专利]猪流行性腹泻病毒N基因的RT-RAA荧光法检测引物对、试剂盒及检测方法有效
| 申请号： | 202111237943.2 | 申请日： | 2021-10-25 |
| 公开（公告）号： | CN113930547B | 公开（公告）日： | 2022-07-26 |
| 发明（设计）人： | 张新珩;谢青梅;巫秀红;刘远佳;严专强 | 申请（专利权）人： | 华南农业大学 |
| 主分类号： | C12Q1/70 | 分类号： | C12Q1/70;C12Q1/6844;C12N15/11 |
| 代理公司： | 北京高沃律师事务所 11569 | 代理人： | 苏士莹 |
| 地址： | 510642 *** | 国省代码： | 广东;44 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 流行性 腹泻 病毒 基因 rt raa 荧光 检测 引物 试剂盒 方法 | ||
【权利要求书】：
1.一种检测猪流行性腹泻病毒的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括引物对和针对猪流行性腹泻病毒N基因设计的探针；
所述引物对包括正向引物和反向引物；所述正向引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示，反向引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示；
所述探针的核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示。
2.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括阳性对照品和阴性对照品。
3.根据权利要求2所述的试剂盒，其特征在于，所述阳性对照品的扩增碱基序列如SEQID NO.4所示；所述阴性对照品包括ddH2O。
4.一种非诊断目的的检测猪流行性腹泻病毒的方法，其特征在于，包括如下步骤：
提取待测样本的RNA，以待测样本的RNA为模板，利用1~3任一项所述的试剂盒进行RT-RAA反应；
结果判定：若出峰时间≤19.5min或Ct值≤39，则待测样本为猪流行性腹泻病毒阳性；若出峰时间＞19.5min或Ct值＞39，则待测样本为猪流行性腹泻病毒阴性。
5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，所述RT-RAA的反应温度为41℃，反应时间为20~30min。
6.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，所述试剂盒中的引物对的正向引物和反向引物的工作浓度均为10μmol/L；所述试剂盒中的探针的工作浓度为10μmol/L。
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