[发明专利]J亚型禽白血病病毒gp85基因的RT-RAA荧光法检测引物对、试剂盒及检测方法

说明书

本发明涉及分子生物学技术领域，特别是涉及J亚型禽白血病病毒gp85基因的RT‑RAA荧光法检测引物对、试剂盒及检测方法。本发明所述引物对包括正向引物和反向引物；所述正向引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示，反向引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示。本发明提供的引物对可以特异性扩增J亚型禽白血病病毒gp85基因，利用该引物对可以特异性检测J亚型禽白血病病毒，且检测周期更短、特异性更强。

技术领域

本发明涉及分子生物学技术领域，特别是涉及J亚型禽白血病病毒gp85基因的RT-RAA荧光法检测引物对、试剂盒及检测方法。

背景技术

禽白血病是由反转录病毒科禽反转录病毒属的禽白血病病毒(Avianleukosisvirus，ALV)引起的，以造血细胞增生为主的一类肿瘤性疾病，主要是淋巴细胞性禽白血病，其次是成红细胞性禽白血病、成髓细胞性禽白血病、结缔组织肿瘤、肾瘤、肾胚细胞瘤，以及各种其他上皮性肿瘤、内皮性肿瘤和神经肿瘤。近几年髓细胞样禽白血病呈现逐步上升的趋势，替代淋巴禽白血病成为主要类型。

国内目前各地流行的禽白血病的ALV主要是A、B、J亚群，在这三个亚群中，J型感染程度最为严重，而且在蛋鸡、肉鸡和很多地方品系的鸡群中都有所发现。然而，到目前为止，J亚群禽白血病尚无有效的治疗药物与疫苗。近十年来，ALV-J已经从传染性强的慢性致瘤性病毒演变成传染性很强的急性致瘤性病毒，给ALV-J的防控带来一定困难。

ALV-J的控制和清除在于尽早地诊断病鸡，因此，研究ALV-J的诊断方法十分必要。ALV-J的ELISA诊断方法用于检测群特异性抗原，但却会因为检测到内源性病毒群特异性抗原而出现假阳性。

发明内容

为了解决上述问题，本发明提供了J亚型禽白血病病毒gp85基因的RT-RAA(重组酶介导链替换核酸扩增法)荧光法检测引物对、试剂盒及检测方法。本发明提供的引物对可以特异性扩增J亚型禽白血病病毒gp85基因，利用该引物对可以检测低拷贝模板的J亚型禽白血病病毒核酸且规避因内源性禽白血病毒引起的假阳性现象，特异性更强。与现有的常规检测方法相比，检测周期更短。

为了实现上述目的，本发明提供如下技术方案：

本发明提供了一种J亚型禽白血病病毒gp85基因的RT-RAA荧光法检测引物对，所述引物对包括正向引物和反向引物；所述正向引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示，反向引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示。

本发明还提供了上述引物对在制备检测J亚型禽白血病病毒的试剂或试剂盒中的应用。

本发明还提供了一种检测J亚型禽白血病病毒的试剂盒，所述试剂盒包括上述的引物对。

优选的，所述试剂盒还包括针对J亚型禽白血病病毒gp85基因设计的探针。

优选的，所述探针包括核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示的探针。

优选的，所述试剂盒还包括阳性对照品和阴性对照品；

所述阳性对照品包括含有J亚型禽白血病病毒SCAU1903的核酸；所述阴性对照品包括ddH₂O。

优选的，所述阳性对照品的扩增碱基序列如SEQ ID NO.4所示。

本发明提供了一种非诊断目的的检测J亚型禽白血病病毒的方法，包括如下步骤：

提取待测样本的RNA，以待测样本的RNA为模板，利用上述的试剂盒进行RT-RAA反应；

结果判定：若出峰时间≤19.5min或Ct值≤39，则待测样本为J亚型禽白血病病毒阳性阳性；若出峰时间＞19.5min或Ct值＞39，则待测样本为J亚型禽白血病病毒阳性阴性。