[发明专利]一种分子检测方法

权利要求书

1.一种分子检测方法，其特征在于：基于SPR分析仪上完成分子检测分析，首先，在载有用于检测的核糖核酸（RNA）探针微阵列的SPR芯片上，使用具有链置换活性的DNA聚合酶、扩增引物等对检测分子进行恒温扩增获得单链DNA扩增产物；若检测分子中含有阳性序列，则单链DNA扩增产物会与SPR芯片上的互补核糖核酸探针杂交；随后，反应混合液中的RNaseH会特异性分解与单链DNA扩增产物杂交的核糖核酸探针，SPR芯片上的探针被分解后，对应区域的SPR条件将发生改变，最终对应区域反射光的强度将发生变化。

2.如权利要求1所述的一种分子检测方法，其特征在于：单链DNA扩增产物的扩增包括以下步骤：

制备选自下组的反应混合物

（a）含有目标（模板）的核酸、脱氧核糖核苷三磷酸、具有链置换活性的DNA聚合酶、至少两种扩增引物和具有RNase H活性的酶或催化剂等可以反应生成单链DNA的反应扩增混合物；或

（b）含有目标（模板）的核酸、脱氧核糖核苷三磷酸、核糖核苷三磷酸、至少两种扩增引物、Reverse transcriptase、RNA polymerase和具有RNase H活性的酶或催化剂等可以反应生成单链DNA的反应扩增混合物；或

（c）含有目标（模板）的核酸、含有至少两种扩增引物、例如但不限于具有RNase H活性的各种酶或催化剂等的可以反应生成单链DNA或形成可与芯片表面探针杂交的状态的反应混合物；或

（d）含有目标（模板）的核酸的通过改变温度、溶液离子强度、pH等变性成单链DNA或形成可与芯片表面探针杂交的状态的含有例如但不限于具有RNase H活性的酶或催化剂的反应混合物；

在恒温或温度变化等的条件下，将目标（模板）的核酸扩增生成单链DNA或变性成单链DNA或形成可与芯片表面探针杂交的状态。

3.如权利要求2所述的一种分子检测方法，其特征在于：当使用反应混合物（a）、（b）或（c）时，作为目标（模板）的核酸为DNA或RNA；当目标（模板）的核酸是RNA时，需事先用脱氧核糖核苷三磷酸、具有逆转录活性的酶和至少引物处理核酸，以便将核酸转化为逆转录产物；同时，反应混合物可以含有具有逆转录活性的酶，也可以使用单一的具有逆转录酶活性和链置换活性的DNA聚合酶。

4.如权利要求1所述的一种分子检测方法，其特征在于：互补核糖核酸探针的构成可采用以下形式：

（a）探针全部由核糖核酸（RNA）构成；

（b）探针由核糖核酸（RNA）与脱氧核糖核酸（DNA）构成。

5.如权利要求1所述的一种分子检测方法，其特征在于：基因芯片相关的制备方法﹑芯片材质﹑形态：

（a）基因芯片的制备可采用但不限于原位合成﹑探针吸附固定﹑探针共价偶联固定；

（b）基因芯片的材质可采用但不限于玻璃，PMMA，硝酸纤维素膜﹑聚偏二氟乙烯膜﹑SPR芯片﹑芯片复合材质﹑磁珠﹑各种材质的纳米颗粒；

（c）基因芯片的形态可采用但不限于由一种或多种探针微阵列构成﹑基因芯片与其它种类芯片复合构成﹑纳米颗粒型基因芯片﹑微流控复合型基因芯片；

（d）其它芯片领域内的不同形式。