[发明专利]U型接头及采用U型接头介导的磁珠偶联转座酶进行RNA快速均一化建库的方法

权利要求书

1.一种用于结合磁珠并偶联转座酶的U型接头，所述U形接头为：5’-[Phos] CTGTCTCTTATACACATCTNNNNNNNNAGATCGGAAGAGCACACGTCTGAACTCCAGTCACTTT[Int NH2 C6 dT]TTTACACTCTTTCCCTACACGACGCTCTTCCGATCTA

GATGTGTATAAGAGACAG-3’、 5’-GTGACTGGAGTTCAGACGTGTGCTCTTCCGAT

CTNNNNNNNNAGATGTGTATAAGAGACAG-3’以及5’-[Phos] -CTGTCTCTTATACA

CAAGATCGGAAGAGCGTCGTGTAGGGAAAGAGTGT-3’三条寡核苷酸序列的退火产物，磁珠为羧基磁珠。

2.根据权利要求1所述的U型接头，其特征在于三条寡核苷酸中，长寡核苷酸与两条短寡核苷酸的摩尔量比为1：3：3-1：10:10。

3.根据权利要求1或2所述的U型接头，其特征在于U型接头的退火程序为95℃ 5 min，90℃ 5 min，85℃ 5 min，80℃ 5 min，75℃ 1 h，4℃ hold。

4.一种采用U型接头介导的磁珠偶联转座酶进行RNA快速均一化建库的方法，其特征在于其步骤包括：

（1）使用随机引物对RNA样本进行逆转录，得到DNA/RNA杂交链；

（2）使用U型接头介导的磁珠偶联转座酶对DNA/RNA杂交链进行片段化反应；

（3）片段化产物末端修复和文库扩增；

其中所述的U型接头为权利要求1、2或3所述的U型接头。

5.根据权利要求4所述的采用U型接头介导的磁珠偶联转座酶进行RNA快速均一化建库的方法，其特征在于逆转录反应使用随机引物N8，逆转录反应使用翌圣生物的Hifair® ⅡReverse Transcriptase；反应程序为25℃ 10 min，42℃ 30 min，85℃ 5 min。

6.根据权利要求5所述的采用U型接头介导的磁珠偶联转座酶进行RNA快速均一化建库的方法，其特征在于逆转录反应中还加入rRNA的逆转录阻碍探针。

7.根据权利要求4所述的采用U型接头介导的磁珠偶联转座酶进行RNA快速均一化建库的方法，其特征在于片段化反应条件为55℃反应10-30 min。

8.根据权利要求4所述的采用U型接头介导的磁珠偶联转座酶进行RNA快速均一化建库的方法，其特征在于片段化产物末端修复和文库扩增同时进行，末端修复使用逆转录酶，文库扩增使用翌圣生物的2×Hieff Canace® Gold PCR Master Mix高保真酶预混液，反应温度为40-65℃，反应时间为10-30 min。