[发明专利]HER2 mRNA及环状RNA多重荧光定量PCR检测引物探针及其应用

说明书

本发明涉及基因分子检测领域，公开了一种HER2 mRNA及环状RNA多重荧光定量PCR检测引物探针及应用方法。本发明提供了一种HER2 mRNA及环状RNA多重荧光定量PCR检测引物对及特异性探针，能够同时检测HER2 mRNA及环状RNA；本发明还提供了HER2 mRNA及环状RNA多重荧光定量PCR检测试剂盒，该试剂盒具有高度的特异性与专一性，并且扩增效率高，灵敏度高，准确率高，重现性好，检测周期短，且能实时检测DNA扩增反应，具有很高的可行性与应用前景；本发明的又一个目的是提供上述检测引物对及特异性探针或检测试剂盒的应用。

技术领域

本发明属于基因分子检测领域，具体涉及一种HER2 mRNA及环状RNA多重荧光定量PCR检测引物探针及应用方法。

背景技术

自2012年以来，随着高通量测序以及生物信息学技术的不断进步，研究者在多种生物体中陆续发现了大量存在的环状RNA(circular RNA，circRNA)分子，环状RNA广泛存在于真核生物中并在个体发育以及多种疾病的发生发展过程中扮演重要的生物学功能。中国科学院与科睿唯安联合发布的《研究前沿》报告和《研究前沿热度指数》，“环状RNA作为新的疾病标志物”成为生物科学领域新兴前沿方向的TOP1，这也是环状RNA连续三年进入前沿研究报告的名单，且三次均为榜单中的TOP1热点方向，这在生命科学与医学领域乃至所有学科方向中都非常罕见，足见环状RNA的研究热度和意义。环状RNA是一类不具有5＇末端帽子和3＇末端以共价键形成环状结构的RNA分子，环状RNA由于形成闭合的环状结构，使其能够耐受RNA外切酶切割，比线性的mRNA分子稳定性强，多数由外显子环化形成，大部分环状RNA长度分布在200-2000bp区间。人类的环状RNA数据库circbase中收录了来自多种组织类型及细胞类型的环状RNA数目达到10万个，其中一部分环状RNA分子具有较高的丰度以及进化上的序列保守性，提示环状RNA应该具有比较重要的生物学功能。在人类疾病的发生过程中往往有一些环状RNA表达异常，提示环状circRNA可能参与了这些疾病的发生发展。近年来，越来越多的研究证实，circRNAs以多种方式发挥其生物学功能，环状RNA可以通过吸附小分子microRNA扮演分子海绵的方式对基因进行翻译水平的表达调；环状RNA和蛋白质互作，可以调控蛋白质的细胞定位或稳定性，从而影响信号通路的激活或者抑制；含有内含子序列的环状RNA往往定位于细胞核内，在细胞核内的环状RNA可以通过与RNA聚合酶互作影响DNA到RNA的转录调控，激活目标基因的转录；近年来最新的研究报道环状RNA还可以作为模板翻译新的蛋白质或者多肽翻译发挥重要的生物功能。