[发明专利]HER2 mRNA及环状RNA多重荧光定量PCR检测引物探针及其应用

权利要求书

1.一种HER2基因的mRNA及环状RNA多重荧光定量PCR检测引物对及特异性探针，其特征在于，所述环状RNA包括环状RNA circ-HER2-676nt和环状RNA circ-HER2-565nt；

所述HER2 mRNA的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示；

所述circ-HER2-676nt的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示；

所述circ-HER2-565nt的核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示。

2.根据权利要求1所述的多重荧光定量PCR检测引物对及特异性探针，其特征在于：

HER2 mRNA的特异检测引物对及特异性探针为：

HER2-mRNA-F：5’-GCCCTGGTCACCTACAACAC-3’；

HER2-mRNA-R：5’-ATCCTCTGCTGTCACCTCTT-3’；

HER2-mRNA-probe：5’-ACACAGCTGGCGCCGAATGTA-3’；

环状RNA circ-HER2-676nt的特异检测引物对及特异性探针为：

Circ-HER2-676nt-F：5’-GTGACTGCCTGTCCCTGATA-3’；

Circ-HER2-676nt-R：5’-TCGCACAATCCGCAGCCTCT-3’；

Circ-HER2-676nt-probe：5’-CTACGTGCTCATCGCTCACAAC-3’；

环状RNA circ-HER2-565nt的特异检测引物对及特异性探针为：

Circ-HER2-565nt-F：5’-AGATCCCTGACCTGCTGGAA-3’；

Circ-HER2-565nt-R：5’-CAGCCATCACGTATGCTTCA-3’；

Circ-HER2-565nt-probe：5’-CAGCCCCCCATCTGCACCAT-3’。

3.根据权利要求1所述的多重荧光定量PCR检测引物对及特异性探针，其特征在于，所述HER2 mRNA特异性探针、circ-HER2-676nt特异性探针和circ-HER2-565nt特异性探针的5’端带有荧光基团，3’端带有淬灭基团；

所述荧光基团为FAM、HEX、TET、JOE、NED、VIC、CY3、CY5、ROX或TAMRA中的任意一种或至少两种的组合；

所述淬灭基团选自MGB、BHQ-1、BHQ-2、BHQ-3或Phosphorothioate中的任意一种或至少两种的组合。

4.一种用于同时检测HER2基因的mRNA及环状RNA的检测试剂盒；其特征在于，所述试剂盒包括权利要求1中所述的HER2基因的mRNA及环状RNA多重荧光定量PCR检测引物对及特异性探针。

5.一种权利要求1所述的HER2基因的mRNA及环状RNA多重荧光定量PCR检测引物对及特异性探针或权利要求4所述的检测试剂盒在检测HER2基因的mRNA及环状RNA单一表达或混合表达中的应用。

6.根据权利要求5所述的应用，其特征在于，提取细胞来源样品中的RNA，去除提取RNA中的残留基因组DNA，将所述RNA反转录为cDNA，利用权利要求1中所述HER2基因的mRNA及环状RNA多重荧光定量PCR检测引物对及特异性探针对所述HER2基因的mRNA及环状RNA的cDNA进行扩增。

7.根据权利要求5所述的应用，其特征在于，进行扩展时使用的荧光定量PCR反应体系总体积为20μL，其中：2×QPCR MIX 10μL；浓度为10μM的三对上下游引物各加0.4μL；三条浓度为10μM的特异性探针各加0.1μL；稀释5倍后的cDNA各加1μL；加灭菌水至总体积为20μL。

8.根据权利要求5所述的应用，其特征在于，扩增反应条件为：扩增程序为95℃3min，95℃10s，60℃10s，60℃31s，40个循环。