[发明专利]一种Rg1联合hAD-MSCs治疗POI的实验方法

说明书

本发明涉及一种Rg1联合hAD‑MSCs治疗POI的实验方法，具体包括以下步骤：1)人羊膜间充质干细胞hAD‑MSCs的培养；2)流式细胞术对hAD‑MSCs的鉴定；3)辐射诱导构建卵巢功能不全POI大鼠模型。本发明优点在于：方案设计合理，方便实施操作，有助于解决临床问题，具有很好的推广前景。

技术领域

本发明涉及一种Rg1联合hAD-MSCs治疗POI的实验方法。

背景技术

卵巢早衰(premature ovarian failure，POF)是指青春期之后40岁以前出现非生理性、至少4个月以上闭经，并有两次或两次以上血清促卵泡激素(follicle-stimulatinghormone，FSH)＞40μ/L(两次检查时间间隔1个月以上)，血清雌二醇(estradiol，E2)＜73.2pmol/L^[1]，临床主要表现为(1)原发或继发不孕、(2)低雌激素症状：如潮热，多汗，注意力下降，性欲减退，性交痛，阴道干涩，并有不同程度的生殖器官及乳房萎缩等、(3)远期并发症：骨质疏松，心血管疾病，老年性痴呆等。POF的发病机制尚不明确，多数学者认为其发病机制与生殖细胞的迁移、卵原细胞的有丝分裂和减数分裂的发动并形成原始卵泡有关。这个复杂过程的任一环节一旦被扰乱就可引起原始卵泡池减少而导致POF。目前研究认为POF病因包括：(1)遗传因素:诸如患者X染色体数量以及结构出现异常；常染色体各组相关基因突变等；(2)免疫相关因素:诸如患者存在卵巢自体免疫性抗体；(3)患者的原始卵泡储备不足；(4)患者自身因素:诸如患者卵泡刺激素受体缺陷或存在高促性腺激素血症等；患者卵泡闭锁或耗竭加速；(5)半乳糖－1－磷酸盐尿苷转移酶或17α羟化酶等酶缺陷；(6)其他因素:诸如手术、放化疗以及环境毒素等。POF在40岁之前的发病率为1/100，30岁之前为1/1000，20岁之前为1/10000，其中在原发闭经者中占10％～28％，继发闭经者中占4％～18％，且发病率呈逐年上升的趋势，并有年轻化的趋势^[2]。在过去，我们对POF了解太少，近来，随着我们对POF认识的深入，许多治疗方法用于改善POF的症状和不同种类POF动物模型被建立作为辅佐研究的工具。动物模型建立成功的标准是基于血清性激素的改变，卵巢上卵泡的成熟度，卵巢的破坏程度。为了不同病因研究的需要，研究者们建立了不同的POF动物模型。其中半乳糖代谢紊乱模型因成模时间短，所需要的研究成本低，而且其主要的病理机制为氧化损伤，该模型可以模拟很多疾病的发病过程而备受研究者们的青睐。

D-gal是人体所需要的营养物质，也是身体许多大分子物质生物合成需要的基本物质。人体摄入乳糖后，被肠道的乳糖酶转化为葡萄糖和半乳糖，半乳糖进一步代谢为UDP-葡萄糖，该步骤涉及到三个重要的酶，1)半乳糖激酶，2)半乳糖-1磷酸-尿苷酰转移酶(galactose-1-phosphate uri-dyltransferase GALT)，3)UDP-半乳糖-4-差向异构酶。上述三种酶的缺乏导致半乳糖生物代谢的三大紊乱^[3]，其中最常见，最经典的是半乳糖血症，它是一种隐形遗传导致GALT的缺乏。在卵巢上，这三种酶的含量是很丰富的^[4]，这个发现被证实是因为观察到妇女们缺乏或低的GALT酶活性更容易患POF和早绝经^[5-9]。D-gal POF妇女发病的确切机制尚未被阐明，但是目前正在研究中，对其机制的研究将有助我们寻找D-gal血症的个体化治疗,获得更多日常生活中摄入D-gal饮食与卵巢功能异常相关的信息。