[发明专利]一种选择性扩增同种反应性NK细胞的NK细胞体外培养方法

说明书

本发明公开了一种选择性扩增同种反应性NK细胞的NK细胞体外培养方法，该方法包括将NK细胞置于含饲养细胞的培养液中培养的步骤；所述的饲养细胞为与NK细胞HLA‑Cw位点不合的PMBC。本发明采用与NK细胞Cw位点不合的PMBC作为饲养细胞，则NK细胞中表达不能和饲养细胞表面Cw位点结合的KIR表型的NK细胞亚群即被活化，产生优势扩增；因此，在器官移植前的配型阶段，选择与受者Cw位点不合的供者，并采用受者PMBC作为饲养细胞对供者NK细胞进行饲养，即可使同种反应性NK细胞优先扩增，经过2‑3周的培养，NK细胞数量能够增殖至初始时的40‑70倍，且同种反应性NK细胞的纯度可达90％以上。

技术领域

本发明属于生物医药技术领域，具体涉及一种选择性扩增同种反应性NK细胞的NK细胞体外培养方法。

背景技术

自然杀伤细胞(natural killer cell，NK细胞)是不同于T、B淋巴细胞的一类大颗粒淋巴细胞，它是天然免疫系统的主要效应细胞，无需抗原预先致敏，表现为速发效应，因此位于机体抵御肿瘤和病毒感染的第一道防线；同时又能通过分泌多种细胞因子和趋化因子来调节获得性免疫，故也是连接天然免疫与获得性免疫的桥梁。NK细胞活性的发挥是依靠其表面表达的各种受体分子与靶细胞相应配体相互作用的结果，其中最重要的是杀伤细胞免疫球蛋白样受体(killer cell immunoglobulin-like receptor，KIR)。

KIR是属于免疫球蛋白超家族受体，表达于NK细胞表面；KIR分为抑制型和活化型两组，每一组均有其特定的细胞外结构域，且均与特定的配体(HLA-Ⅰ类抗原)结合，分别介导抑制性或活化性反应。其中，KIR2DL2/2DL3、2DS2识别HLA-Cw1、-Cw3、-Cw7、-Cw8、-Cw12、-Cw13、-Cw14、-Cw16，这一组HLA-Ⅰ类抗原的共同特点是第80位氨基酸残基为天门冬氨酸(C1组)；而KIR2DL1/2DS1识别HLA-Cw2、-Cw4、-Cw5、-Cw6、-Cw15、Cw*-1602、-Cw17、-Cw18，这一组HLA-Ⅰ类抗原的共同特点是第80位氨基酸残基为赖氨酸(C2组)。NK细胞通过KIR识别自体HLA-Ⅰ类抗原达到对自身的免疫耐受，当异源细胞不具备被NK细胞表面抑制性KIR受体识别的HLA-Ⅰ类抗原时，即产生同种反应性NK细胞，同种反应性NK细胞活化扩增以杀伤异源细胞。

近年来，由于对NK细胞受体识别模式的深入认识，同种反应性NK细胞在异基因造血干细胞移植(Allo-HSCT)中，尤其是在配型不合的Allo-HSCT中的作用受到广泛关注。

Ruggeri等于2002年在science杂志上报道，在急性髓系白血病的骨髓移植研究中，当供者KIR与受者MHC-I(MHC即主要组织相容性复合体，人类的MHC被称为HLA)受体不相合时，GVHD(移植物抗宿主病)的发生降低，移植后5年无复发生存明显延长。这一重大发现提示供受者KIR-配体不相合所引起的同种反应性NK将为从根本上解决骨髓移植中GVHD和GVL(移植物抗白血病效应)的问题带来新的希望。在供、受者之间KIR-配体不相容性引发的同种反应性NK细胞活性在理论上将对HSCT具有诸多有利影响，NK细胞可能通过杀伤受者树突状细胞等抗原递呈细胞而有效地减少GVHD的发生；通过杀伤宿主T细胞而防止移植排斥，促进移植物植入；同时由于活化NK细胞具有强大的抗肿瘤，因此还能增强GVL效应，避免移植后复发。