[发明专利]一种选择性扩增同种反应性NK细胞的NK细胞体外培养方法

权利要求书

1.一种选择性扩增同种反应性NK细胞的NK细胞体外培养方法，其特征在于，包括将NK细胞置于含饲养细胞的培养液中培养的步骤；

所述的饲养细胞为与NK细胞HLA-Cw位点不合的外周血单个核细胞。

2.如权利要求1所述的选择性扩增同种反应性NK细胞的NK细胞体外培养方法，其特征在于，所述的饲养细胞在加入培养液前预先作去增殖能力处理。

3.如权利要求2所述的选择性扩增同种反应性NK细胞的NK细胞体外培养方法，其特征在于，采用丝裂霉素处理饲养细胞以使培养细胞失去增殖能力；

或者，采用γ射线或Co₆₀放射灭活饲养细胞以使培养细胞失去增殖能力。

4.如权利要求3所述的选择性扩增同种反应性NK细胞的NK细胞体外培养方法，其特征在于，用培养液将所述的饲养细胞的浓度调整至1×10⁶～2×10⁶cells/mL，并加入终浓度为15-40μg/mL的丝裂霉素处理15-45min，而后用PBS洗涤以去除丝裂霉素。

5.如权利要求2所述的选择性扩增同种反应性NK细胞的NK细胞体外培养方法，其特征在于，采用植物血凝素刺激饲养细胞增殖至预设数量后再作去增殖能力处理。

6.如权利要求5所述的选择性扩增同种反应性NK细胞的NK细胞体外培养方法，其特征在于，用培养液将所述的饲养细胞的浓度调整至1×10⁶～2×10⁶cells/mL，并加入终浓度为3-8μg/mL的植物血凝素和100-300U/mL的白细胞介素2，培养72-96h。

7.如权利要求1所述的选择性扩增同种反应性NK细胞的NK细胞体外培养方法，其特征在于，所述的培养液中，NK细胞与饲养细胞的浓度比为1:(3-7)。

8.如权利要求7所述的选择性扩增同种反应性NK细胞的NK细胞体外培养方法，其特征在于，所述的培养液中，NK细胞与饲养细胞的浓度比为1:5。

9.如权利要求1-8中任意一项所述的选择性扩增同种反应性NK细胞的NK细胞体外培养方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)从供者外周血中富集NK细胞；

(2)将NK细胞和饲养细胞分别接种至培养液中，并向培养液中加入终浓度为300-800U/mL的白细胞介素2和终浓度为50-200ng/mL的白细胞介素15，而后置于37℃、5％CO₂、饱和湿度的条件下培养2-3周。

10.如权利要求9所述的选择性扩增同种反应性NK细胞的NK细胞体外培养方法，其特征在于，步骤(2)中，每隔3-4天换液一次，并更新饲养细胞、白细胞介素2和白细胞介素15。