[发明专利]快速分型检测HPV16型和HPV18型病毒的引物组、试剂盒及分析方法

权利要求书

1.一种快速分型检测HPV16型和HPV18型病毒的引物组，其特征在于，为选择HPV16型和HPV18型的L1区设计特异的RPA引物组，所述RPA引物组的核酸序列包括：

通用上游引物F:

5’-GAATATGATTTACAGTTTATTTTTCAGCTGTG-3’；

通用下游引物R:

5’-FAM-ATTTAAAGGAAAAGTTTTCTGTAGACCTAGATCA-3’；

使用特异性的探针对通用引物进行区分，并对其进行不同标记，其中通用下游引物R的序列5端用FAM标记，HPV16型探针序列5端标记生物素，3端用C3 spacer进行封闭，中间距离3端15个碱基处使用四氢呋喃进行处理；HPV18型探针序列5端标记地高辛，3端用C3 spacer进行封闭，中间距离3端15个碱基处使用四氢呋喃进行处理，具体的引物组序列及其标记如下：

16P:Biotin-AACATCCCAGGCAATTGCTTGTCAAAAACA/THF/ACACCTCCAGCACCT-C3 Spacer；

18P:Dig-ACAATCTGTTGCTATTACCTGTCAAAAGGA/THF/GCTGCACCGGCTGAA-C3 Spacer。

2.根据权利要求1所述的快速分型检测HPV16型和HPV18型病毒的引物组，其特征在于，所述HPV16型和HPV18型的L1区的具体区域分别为ID为MN961217.1的HPV16型基因组的6746bp-6949bp位和ID为LC509006.1的HPV18型基因组的6720bp-6923bp位。

3.一种快速分型检测HPV16型和HPV18型病毒的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括权利要求1或2所涉及的引物组。

4.根据权利要求3所述的快速分型检测HPV16型和HPV18型病毒的试剂盒，其特征在于，包括核酸提取试剂、RPA扩增总反应体系和双标记的胶体金免疫层析试纸条；

所述双标记的胶体金免疫层析试纸条包括PVC背衬板及在所述PVC背衬板上依次按预设顺序装配的样品垫、纳米金颗粒结合垫、硝酸纤维素膜层和吸水垫；所述硝酸纤维素膜层上设有喷涂链霉亲和素的第一检测线、喷涂抗地高辛抗体的第二检测线和喷涂第二抗体的质控线；所述纳米金颗粒结合垫上具有胶体金标记抗FAM抗体。

5.一种快速分型检测HPV16型和HPV18型病毒的试剂盒的分析方法，其特征在于，所述分析方法流程如下：

S1、待检样本中核酸的释放或提取；

S2、以处理过的所述待测样本为模板，使用RPA恒温扩增方法对模板进行扩增，得到RPA扩增产物；

S3、使用双标记的胶体金免疫层析试纸条对所述RPA扩增产物进行检测，根据试纸条上条带的有无对阴阳性进行判断及具体型别的鉴定。

6.根据权利要求5所述的快速分型检测HPV16型和HPV18型病毒的试剂盒的分析方法，其特征在于，所述步骤S1中待检样本中核酸的释放或提取采用的是一步法核酸提取试剂，进行核酸释放，形成待扩增模板。

7.根据权利要求5所述的快速分型检测HPV16型和HPV18型病毒的试剂盒的分析方法，其特征在于，所述步骤S1之前还包括将质控品用生理盐水稀释至相应浓度后，采用的是一步法核酸提取试剂，进行核酸释放，形成待扩增模板，形成对照组。

8.根据权利要求5所述的快速分型检测HPV16型和HPV18型病毒的试剂盒的分析方法，其特征在于，所述步骤S2中采用的RPA扩增总反应体系体积为50μL,包括280mM醋酸镁2.5μL，模板2-10μL，溶解剂29.5μL，10μM通用上样引物0.5-5μL，10μM通用下游引物0.5-5μL，10uM HPV16型探针0.1-2μL，10μM HPV18型探针各0.1-2μL，余量为蒸馏水。