[发明专利]一种快速鉴定和定量肠炎沙门菌的探针法双重荧光定量PCR引物组及试剂盒

说明书

本发明属于生物技术检测领域，具体涉及一种快速鉴定和定量肠炎沙门菌的探针法双重荧光定量PCR引物组及试剂盒，所述PCR引物组中包括用于分别检测lygD基因和invA基因的引物对，进一步的，所述PCR引物组中包括1)第一引物对：包括核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示的上游引物与核苷酸序列如SEQ ID NO:2所示的下游引物；2)第一探针引物：核苷酸序列如SEQ ID NO:3所示；3)第二引物对：包括核苷酸序列如SEQ ID NO:4所示的上游引物与核苷酸序列如SEQ ID NO:5所示的下游引物；4)第二探针引物：核苷酸序列如SEQ ID NO:6所示。所述试剂盒中包括所述引物组。本发明的试剂盒能快速高通量鉴定和定量肠炎沙门菌，可替代传统沙门菌血清学分型和生化鉴定等复杂程序。

技术领域

本发明涉及生物技术检测领域，特别是涉及一种快速鉴定和定量肠炎沙门菌的探针法双重荧光定量PCR引物组及试剂盒。

背景技术

沙门菌病是公共卫生学上有重要意义的传染病之一，是食源性细菌性肠炎的主要原因之一，大多数沙门菌感染病例是由于食用受污染的食物或水所致，例如猪肉、牛肉、家禽和鸡蛋。在众多血清型沙门菌中，肠炎沙门菌是导致人类严重感染的最重要病原体之一。肠炎沙门菌感染人体后会引起胃肠炎、腹泻、呕吐甚至严重全身性感染。肠炎沙门菌能够在蛋清中存活进而污染蛋制品，导致重大经济和健康负担。

传统的沙门菌血清分型是基于Kauffman-White通过细菌表面O和H抗原的特异性抗血清进行鉴定。尽管这种方法应用广泛，但由于需要传统的基于培养的方法，因此这种方法相对昂贵、工作量大且耗时较长。因此准确的鉴定方法对于沙门菌病的防控至关重要，因此建立一种流行沙门菌血清型快速准确的鉴定方法可以促进常规监测和公共卫生安全。聚合酶链式反应(PCR)因其快速、高通量、高灵敏度和特异性而被广泛研究。与传统PCR不同，探针法荧光定量PCR方法不需要通过凝胶电泳分析来确认细菌病原体的存在，并且可以对数据进行实时定量分析，及时鉴定肠炎沙门菌对于沙门菌病的有效防控意义重大。

发明内容

鉴于以上所述现有技术的缺点，本发明的目的在于提供一种快速鉴定和定量肠炎沙门菌的探针法双重荧光定量PCR引物组及试剂盒，用于解决现有技术中的问题。

为实现上述目的及其他相关目的，本发明提供一种检测肠炎沙门菌的PCR引物组，所述PCR引物组中包括用于分别检测lygD基因和invA基因的引物对。

优选的，所述PCR引物组中包括以下中的任一项或多项：

1)第一引物对：包括核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示的上游引物与核苷酸序列如SEQ ID NO:2所示的下游引物；

2)第一探针引物：核苷酸序列如SEQ ID NO:3所示；

3)第二引物对：包括核苷酸序列如SEQ ID NO:4所示的上游引物与核苷酸序列如SEQ ID NO:5所示的下游引物；

4)第二探针引物：核苷酸序列如SEQ ID NO:6所示。

本发明还提供所述PCR引物组在制备lygD基因和invA基因检测产品中的用途。

本发明还提供一种检测肠炎沙门菌的探针法双重荧光定量PCR检测试剂盒，所述试剂盒包括所述PCR引物组。

本发明还提供所述引物组或所述试剂盒在鉴定和定量检测肠炎沙门菌中的用途。

本发明还提供一种肠炎沙门菌的鉴定方法，所述鉴定方法包括如下步骤：

1)配制PCR反应体系：利用所述探针法双重荧光定量PCR检测试剂盒和待测样品的基因组DNA配制PCR反应体系；

2)PCR反应：将配制完成的PCR反应体系进行PCR扩增；