[发明专利]一种快速鉴定和定量肠炎沙门菌的探针法双重荧光定量PCR引物组及试剂盒

权利要求书

1.一种检测肠炎沙门菌的PCR引物组，其特征在于，所述PCR引物组中包括用于分别检测lygD基因和invA基因的引物对。

2.根据权利要求1所述的PCR引物组，其特征在于，所述PCR引物组中包括以下中的任一项或多项：

1)第一引物对：包括核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示的上游引物与核苷酸序列如SEQIDNO:2所示的下游引物；

2)第一探针引物：核苷酸序列如SEQ ID NO:3所示；

3)第二引物对：包括核苷酸序列如SEQ ID NO:4所示的上游引物与核苷酸序列如SEQIDNO:5所示的下游引物；

4)第二探针引物：核苷酸序列如SEQ ID NO:6所示。

3.根据权利要求2所述的PCR引物组，其特征在于，所述第一探针引物和第二探针引物5’端标记有不同的荧光报告基团，3’端标记有不同的荧光淬灭基团。

4.权利要求1-3任一所述的PCR引物组在制备lygD基因和invA基因检测产品中的用途。

5.根据权利要求4所述的用途，其特征在于，所述lygD基因和invA基因检测产品为肠炎沙门菌鉴定或定量产品。

6.根据权利要求5所述的用途，其特征在于，所述肠炎沙门菌鉴定或定量产品为试剂盒。

7.一种检测肠炎沙门菌的探针法双重荧光定量PCR检测试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括权利要求1-3任一所述的PCR引物组。

8.根据权利要求7所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒中还包括水、Premix ExTaqMaster、ROX Reference Dye II、阳性对照DNA、阴性对照DNA、样品基因组DNA提取试剂中的一种或多种。

9.权利要求1-3任一所述的引物组或权利要求7所述的试剂盒在鉴定和定量检测肠炎沙门菌中的用途。

10.一种肠炎沙门菌的鉴定方法，其特征在于，所述鉴定方法包括如下步骤：

1)配制PCR反应体系：利用权利要求7或8所述的探针法双重荧光定量PCR检测试剂盒和待测样品的基因组DNA配制PCR反应体系；

2)PCR反应：将配制完成的PCR反应体系进行PCR扩增；

3)结果分析：能同时扩增出lygD基因和invA基因的待测样品即为肠炎沙门菌，不能同时扩增出lygD基因和invA基因的待测样品即不是肠炎沙门菌。

11.根据权利要求10所述的鉴定方法，其特征在于，还包括以下特征中的一项或多项：

1)所述待测样品选自食物、水、家禽；

2)步骤1)中配制的PCR反应体系包括待测样品的反应体系、阳性对照的反应体系、阴性对照的反应体系；

3)所述PCR反应体系为25μL体系，其中包括：2×Premix Ex Taq Master 12.5μL，lygD-F240nM，lygD-R 240nM，lygD-P 100nM，invA-F 200nM，invA-R 200nM，invA-P 80nM，DNA模板2.5μL，ROX Reference Dye II 0.25μL，ddH₂O补至25μL；

4)PCR反应的条件为：(a)95℃30s；(b)95℃5s；(c)60℃34s，步骤(b)～(c)循环40次。

12.一种定量检测肠炎沙门菌的方法，其特征在于，所述方法包括如下步骤：

1)配制标准曲线的PCR反应体系：将权利要求8所述的探针法双重荧光定量PCR检测试剂盒中的阳性对照DNA梯度稀释，以梯度稀释后的阳性对照DNA分别作为模板配制标准曲线的反应体系；

2)配制待测样品的PCR反应体系：以待测样品的基因组DNA为模板，利用权利要求8所述的探针法双重荧光定量PCR检测试剂盒配制待测样品的PCR反应体系；

3)配制阴性对照的PCR反应体系：以权利要求8所述的探针法双重荧光定量PCR检测试剂盒中的阴性对照DNA为模板配制阴性对照的PCR反应体系；

4)PCR反应：将配制完成的各PCR反应体系进行PCR扩增；

5)结果分析：通过各PCR反应体系的扩增信号，代入标准曲线计算待测样品中肠炎沙门菌的含量。