[发明专利]一种玉米赤霉醇免疫亲和柱及其制备方法和用途

权利要求书

1.一种玉米赤霉醇免疫亲和柱，包括偶联有玉米赤霉醇单克隆抗体的固相载体、装载其的塑料管及保存液，其特征在于，所述玉米赤霉醇单克隆抗体是以玉米赤霉醇半抗原-载体蛋白偶联物作为免疫原制备获得；所述玉米赤霉醇半抗原的合成方法为：取玉米赤霉酮0.32g，加N,N-二甲基甲酰胺10mL溶解，加L-羟脯氨酸钾0.13g，充分搅拌，加三甲基氰硅烷2.12g，室温搅拌8h，停止反应，加水20mL、1mol/L盐酸3mL，充分搅拌30min，停止搅拌，补加水50mL，加乙酸乙酯20mL×3萃取三次，合并有机相，蒸干得到红色油状物；将所得红色油状物用80％的硫酸溶解，90℃反应4h，停止反应，加6mol/L NaOH调节pH值到6，加二氯甲烷100mL萃取，分去水相，有机相旋蒸蒸干，上硅胶柱，用二氯甲烷和甲醇体积比为10:1的混合溶液洗脱分离，得到羧基玉米赤霉醇，即为玉米赤霉醇半抗原，其分子结构式为：

2.如权利要求1所述的玉米赤霉醇免疫亲和柱，其特征在于，所述固相载体为溴化氰活化琼脂糖凝胶4B。

3.如权利要求1所述的玉米赤霉醇免疫亲和柱，其特征在于，所述载体蛋白为牛血清白蛋白。

4.权利要求1所述的玉米赤霉醇免疫亲和柱的制备方法，其特征在于，该方法包括以下步骤：

1)固相载体活化：将溴化氰活化琼脂糖凝胶4B用1mmol/L HCl溶液浸泡30min，3000～8000r/min离心2～10min分离固相载体，再用0.1mol/L pH 9.0的CB缓冲液洗涤固相载体3～5次，5000r/min离心10min分离固相载体；

2)抗体偶联：向步骤1)活化的固相载体中加入玉米赤霉醇单克隆抗体，再加入0.1mol/LpH 9.0的CB缓冲液，37℃条件下150r/min震荡反应1h；反应结束后，离心分离偶联物，用0.1mol/L pH 8.3的NaHCO₃缓冲液洗涤偶联物3～5次；

3)抗体封闭：向步骤2)的偶联物中加入0.1mol/L pH 8.0的含0.5mol/L NaCl的Tris-HCl溶液，4℃过夜或者37℃、150r/min反应2h封闭未结合位点；反应结束后，用0.1mol/L pH4.0的含0.5mol/L NaCl的醋酸钠溶液与0.1mol/L pH 8.0的含0.5mol/L NaCl的Tris-HCl溶液交替洗涤3～5次，最后用0.1mol/LpH 8.0的含0.5mol/L NaCl的Tris-HCl溶液复溶；

4)装柱：按每支1mL抗体-固相载体偶联物进行装柱，加保存液，4～8℃保存。

5.权利要求1所述的玉米赤霉醇免疫亲和柱的用途，其特征在于，所述用途为提取动物源性食品中的玉米赤霉醇残留。