[发明专利]一种黏果酸浆的特异性核苷酸序列、标记引物及鉴别方法

说明书

本发明涉及一种黏果酸浆的特异性核苷酸序列、标记引物及鉴别方法。用于鉴别黏果酸浆的特征性核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。用于鉴别黏果酸浆的特异性分子标记引物上游序列PHI4F：如SEQ ID NO.2所示；下游序列PHI4R：如SEQ ID NO.3所示。利用特异性标记引物PHI4F/PHI4R，通过常规PCR扩增，电泳检测，即可快速、准确的鉴别出黏果酸浆样品。本发明样品用量少，鉴别结果准确、检测灵敏高，耗时短，半天即可完成，应用方法简便；PHI4F/PHI4R为黏果酸浆专一性扩增引物，若为其他酸浆属植物样品，为阴性反应。

技术领域

本发明属于利用分子生物学方法鉴别黏果酸浆Physalis ixocarpa的技术领域，具体涉及一种黏果酸浆的特异性核苷酸序列、分子特异性标记引物，以及利用该分子特异性标记引物对黏果酸浆进行快速鉴别的方法。

背景技术

黏果酸浆Physalis ixocarpa，是茄科酸浆属中的一种一年生草本植物，具有重要的药用价值和食用价值，是一种非常难得的药食同源植物。黏果酸浆果实味道清香，甜美可口，富含维生素C、胡萝卜素、钙、铁等20多种矿物质和18种人体所需要的氨基酸，同时具有一定的抗肿瘤活性。黏果酸浆与酸浆属的其他近缘物种，如大果酸浆Physalismacrophysa、毛酸浆P.pubescens、小酸浆P.minima、苦蘵P.angulata及酸浆P.alkekengivar.franchetii等植物的茎、叶、花和果实等形态学特征极为相似。利用传统的表型分类方法很难将黏果酸浆与其他酸浆属相似植物鉴别开。这也为黏果酸浆的鉴定和利用带来了一定的麻烦。

与传统形态学鉴定方法相比，DNA分子标记技术克服了环境及基因表达与否的限制，能对不同发育时期的个体、任何组织器官甚至细胞作检测，可以通过基因序列差异比较分析为植物鉴别、系统分类提供直接的证据。目前虽然有一些酸浆属植物的特异性标记鉴定技术方法，但是由于特异性分子标记的特殊性，它是针对特定的物种开发的，物种不同，其引物序列信息及开发技术方案都会有所不同，目前还没有相关黏果酸浆这一酸浆植物物种的特异性位点研究。因此，为了丰富酸浆属植物的特异性分子标记数据库，也为了实现黏果酸浆的快速、准确分子鉴定，本发明提供一种黏果酸浆的特异性核苷酸序列、标记引物及鉴别方法，为黏果酸浆种质资源的鉴别及利用提供有效的分子方法技术。发明人在对黏果酸浆和多种相近酸浆属植物实验材料进行反复试验，以及在大量实验筛选及实验条件优化的基础上获得了黏果酸浆的特异性核苷酸序列，开发了可用于其快速、准确鉴定的特异性标记引物，并建立了其特有的分子鉴定方法。本发明提供的特异性标记引物及其应用方法则非常稳定、简便、直观和准确，能够实现黏果酸浆样品的快速、准确分子鉴定。

发明内容

本发明第一个目的是针对现有技术的不足，提供一种黏果酸浆的特异性核苷酸序列。

本发明用于鉴别黏果酸浆的特征性核苷酸序列是在对被测酸浆属植物大量DNA指纹图谱特异性位点进行筛选的基础上，通过切胶回收、TA克隆和测序分析获得的，其DNA序列如SEQ ID NO.1所示。

本发明的第二个目的是提供基于上述鉴别黏果酸浆核苷酸序列开发的用于鉴别黏果酸浆的特异性标记引物(PHI4F/PHI4R)，该特异性标记引物序列如下：

上游引物PHI4F：5’-ACCCACACCTACCTATGC-3’，如SEQ ID NO.2所示；

下游引物PHI4R：5’-CACTCCACGACCTCACCA-3’，如SEQ ID NO.3所示。

上述特异性分子标记引物(PHI4F/PHI4R)是基于上述黏果酸浆特异性核苷酸序列(如SEQ ID NO.1)开发获得的，具有非常高的特异性，以PHI4F/PHI4R作为特异性扩增引物，对待测酸浆属植物进行PCR扩增，电泳检测结果显示只与黏果酸浆样本DNA发生反应，而不与其他酸浆属植物样品反应。因此，运用该特异性标记引物，通过常规PCR扩增及琼脂糖电泳检测即可以快速鉴别出黏果酸浆样品。