[发明专利]一种黏果酸浆的特异性核苷酸序列、标记引物及鉴别方法有效
申请号: | 202111198860.7 | 申请日: | 2021-10-14 |
公开(公告)号: | CN113755635B | 公开(公告)日: | 2023-09-29 |
发明(设计)人: | 冯尚国;郑凯欣;高雅迪;蔡玉琛;金樱莹;王慧中 | 申请(专利权)人: | 杭州师范大学 |
主分类号: | C12Q1/6895 | 分类号: | C12Q1/6895;C12Q1/686;C12N15/11 |
代理公司: | 杭州君度专利代理事务所(特殊普通合伙) 33240 | 代理人: | 朱亚冠 |
地址: | 311121 浙江*** | 国省代码: | 浙江;33 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 一种 果酸 特异性 核苷酸 序列 标记 引物 鉴别方法 | ||
1.一种用于鉴别黏果酸浆的特异性核苷酸片段,其特征在于该核苷酸片段的序列如SEQ ID NO.1所示。
2.一种用于鉴别黏果酸浆的特异性标记引物,其特征在于:包括如SEQ ID NO.2所示的上游引物PHI4F和如SEQ ID NO.3所示的下游引物PHI4R。
3.利用如权利要求2所述的一种用于鉴别黏果酸浆的特异性标记引物鉴别黏果酸浆的方法,其特征在于该方法包括以下步骤:
步骤一、通过DNA提取获得待测植物样品的总基因组DNA;
步骤二、以步骤一提取的样品总基因组DNA 为DNA模板,以如SEQ ID NO.2所示的上游引物PHI4F和如SEQ ID NO.3所示的下游引物PHI4R作为扩增引物,进行PCR扩增,获得PCR产物;
步骤三、对步骤二扩增获得的PCR产物进行琼脂糖凝胶电泳检测,若电泳结果出现分子量为1464 bp大小的DNA条带,则被测样品为黏果酸浆,反之则不是。
4.如权利要求3所述的方法,其特征在于:步骤二中,所述的PCR扩增的反应体系包括2μL的含MgCl2的10×Buffer,1 μL的10 μM上游引物PHI4F ,1 μL的10 μM下游引物PHI4R ,0.8 μL的10 mM dNTPs ,0.5 μL的2 U/μL
5.如权利要求3所述的方法,其特征在于:步骤二中,所述的PCR扩增的程序为:首先,94℃预变性5 min;其次,94℃变性50 s,54℃退火50 s,72℃延伸1.5 min,共32个循环;最后,72℃进一步延伸10 min。
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