[发明专利]猫胱抑素C荧光定量检测试剂及其制备方法

权利要求书

1.猫胱抑素C荧光定量检测试剂，其特征在于：包括以下原料：处理液、玻璃纤维膜、MES缓冲液、微球、EDC-HCl、NHS、封闭剂、标记稀释液。

2.根据权利要求1所述的猫胱抑素C荧光定量检测试剂的制备方法，其特征在于：以0.1mg抗体标记量计算，包括以下步骤：

S1、结合垫预处理

(1)用10mM的PBS配以下溶液：3％BSA、3％蔗糖、1％PVP-K30、1％酪蛋白、1％PEG20000、0.1％Triton X-100、0.02％NaN3，制得处理液；

(2)室温下，用所述处理液浸泡玻璃纤维膜12h，温度为42℃条件下鼓风干燥机中干燥16h，得到结合垫；

S2、微球缓冲体系调整

用0.25ml、20mmol/L的MES缓冲液稀释0.25mL、1μmol/L微球浓度至0.5μmol/L，最终缓冲体系为10mmol/L的MES缓冲液，其中MES缓冲液为pH6.0；

S3、微球活化

向所述MES缓冲液内加入5ul且浓度为20mg/ml的EDC-HCl和5ul且浓度为20mg/ml的NHS，快速混匀后37℃条件下反应15min，10000g离心20min，弃上清，用10mmol/L、pH6.0的MES缓冲液重新悬浮至体积为0.25mL，混匀；

S4、抗体偶联微球

微球活化后，立即加入0.1mg待标记抗体，迅速混匀，37℃反应1h；

S5、洗涤和封闭

加入25μl封闭剂，混匀，37℃反应0.5h，10000g离心15min，弃上清，用2ml标记稀释液重新悬浮、分散，得到稀释标记物。

S6、喷制结合垫

所述稀释标记物3u l/cm喷制所述结合垫，37℃鼓风干燥机中干燥4h。

3.根据权利要求2所述的猫胱抑素C荧光定量检测试剂的制备方法，其特征在于：S3步骤、S4步骤和S5步骤中，如有聚沉现象，采用超声辅助混匀。

4.根据权利要求2所述的猫胱抑素C荧光定量检测试剂的制备方法，其特征在于：S2步骤中，重新悬浮后使微球浓度恢复为1μmol/L。

5.根据权利要求2所述的猫胱抑素C荧光定量检测试剂的制备方法，其特征在于：所述封闭剂包括以下原料：1％BSA、100mM甘氨酸、1％酪蛋白的10mM PBS溶液。

6.根据权利要求2所述的猫胱抑素C荧光定量检测试剂的制备方法，其特征在于：所述标记稀释液包括以下原料：1％BSA、100mM甘氨酸、1％酪蛋白、0.02％NaN3的10mM PBS溶液。

7.根据权利要求2所述的猫胱抑素C荧光定量检测试剂的制备方法，其特征在于：还包括划膜条件：划线抗体(T线)：0.5mg/ml,3ul/cm,37℃干燥16h。