[发明专利]一种复合微生物除臭菌剂的制备方法及其应用

权利要求书

1.一种复合微生物除臭菌剂的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

S1、称取样品进行菌株的分离纯化；

S2、通过初筛和复筛对除臭优势菌进行筛选；

S3、提取细菌DNA和真菌DNA，通过凝胶电泳进行菌种鉴定；

S4、采用五点对峙法筛选出无拮抗菌种；

S5、进行菌剂复配；

S6、制备固态化微生物颗粒；

所述步骤S5菌剂复配包括菌液制备和复合菌剂的复配，所述复合菌剂的复配包括苏云金芽胞杆菌、酿酒酵母、解淀粉芽孢杆菌、地衣芽胞杆菌、枯草芽胞杆菌、放线菌和灰戴氏霉，将各个菌种配制为菌悬液，单位体积的菌悬液有效活菌数大于1×10⁷CFU，进行正交设计。

2.根据权利要求1所述的一种复合微生物除臭菌剂的制备方法，其特征在于，所述复合菌剂中的苏云金芽胞杆菌、酿酒酵母、解淀粉芽孢杆菌、地衣芽胞杆菌、枯草芽胞杆菌、放线菌与灰戴氏霉的配比为6：1：2：1：6：2：6。

3.根据权利要求1所述的一种复合微生物除臭菌剂的制备方法，其特征在于，所述步骤S6制备固态化微生物颗粒包括：

S61、取3.0g海藻酸钠加热溶解于50mL水中，冷却，加入0.5gSiO₂、0.4g纳米级天然斜发沸石和30mL菌悬液，混合均匀，将混合后的菌悬液滴入质量分数为2％的CaCl₂溶液中；

S62、交联4h后滤出，固定化小球，用生理盐水洗净；

S63、在-20℃的冰箱中冷冻6h，取出解冻，如此反复制得固定化细胞小球。

4.根据权利要求1所述的一种复合微生物除臭菌剂的制备方法，其特征在于，所述菌株的分离纯化包括：

S11、称取样品，加入生理盐水，振荡静置，制成多浓度梯度的稀释液；

S12、配置LB培养基，PDA培养基，高氏一号培养基和MEA培养基，高温灭菌后冷却至50℃-60℃，倒入无菌平板，形成固体平板；选取100μL各浓度梯度的稀释液，分别滴加在4种固体平板上，用已灭菌的涂布棒涂布均匀，每个梯度做3个对照，并做好相应标记；

S13、将经过接种的培养皿倒置放于恒温恒湿培养箱中，温度设置为60℃，湿度为40％，培养12h～24h后取出观察菌落生长状态；

S14、经涂布培养后，固体培养基上菌落数为20～200个的培养皿，挑选形态大小不同、有明显差异的单个菌落，采用平板划线法在LB培养基，PDA培养基，高氏一号培养基和MEA培养基上划线分离，传代3-5次，分离纯化；

S15、将纯化后的菌种接种在相应斜面培养基，并保藏于4℃冰箱。

5.根据权利要求4所述的一种复合微生物除臭菌剂的制备方法，其特征在于，所述筛选的具体步骤包括：

S21、初筛：取新鲜的餐厨垃圾置于容器中，按照3％的接种量将稀释液接种于容器中，混合均匀后密封，30℃静置培养7天；

S22、复筛：将新鲜餐厨垃圾加入广口瓶中，接种5mL纯化得到的菌液，每个菌种三次重复；

接种除氨菌的广口瓶中设有盛有20mL硼酸吸收液的小烧杯，接种脱硫菌的广口瓶中放置盛有20mL碱性锌氨络盐吸收液的小烧杯，广口瓶盖上盖子后用双层塑料膜密封；

置于30℃培养箱中培养，每隔一段时间取出小烧杯，检测NH₃和H₂S的释放量，选出除臭效果好的菌种斜面保存。