[发明专利]一种非抗体依赖的循环肿瘤细胞检测方法

说明书

本发明公开了一种非抗体依赖的循环肿瘤细胞检测方法，包括如下步骤：步骤1、取适量检测者的外周血溶液，并去除红细胞及白细胞，再通过细胞过滤器进行去除红细胞及白细胞的杂质脱除，以此得到循环肿瘤细胞富集提取液；本发明具有以下有益效果，通过采用荧光电子显微镜配合病理图像分析系统，再由适配循环肿瘤细胞的抗体溶液与标记的循环肿瘤细胞进行混合，再次记录结合的数量，提高确定精度，防止多类干扰；采用细胞过滤器进行去除红细胞及白细胞的残留杂质脱除，方便后续处理并提高循环肿瘤细胞在外周血溶液当中的清晰度；加入凝集素，使得循环肿瘤细胞聚集，提高集中度，方便观测，减小漏检可能性。

技术领域

本发明属于细胞检测技术领域，特别涉及一种非抗体依赖的循环肿瘤细胞检测方法。

背景技术

抗体，能识别特定外来物的一个独特特征，该外来目标被称为抗原；

从临床来讲，要判断一个病人是否得了肿瘤，一直是一个很难明确回答的问题，这就会对很多病人造成误诊；比如说胰腺癌往往发现确诊以后都是晚期的，为什么会这样？就是因为在早期的时候，胰腺癌的确诊非常困难；在很多难以确诊的病人的血液中，如果说能够检查到循环肿瘤细胞，那对于配合医生下肿瘤诊断的结论是具有积极意义的；

对于肿瘤的常规检测手段来讲，例如影像学；肿瘤在小于一公分的情况下，医生也不认为它是异常；通过国内外研究可以看到，不要说是一公分，很多肿瘤在2-4毫米的情况下已经有肿瘤细胞进入血液循环，从这个角度讲，它对于早期诊断来讲有不可低估的意义；

大量实验证明CTC的出现与晚期癌症患者的预后密切相关，在进行预期检测时一般仅可通过确定循环肿瘤细胞的数目及大概的外形来预测，为此，急需提出根据单一结合的非依赖(重复)性质，以提高精准确定类型的循环肿瘤细胞检测方法。

发明内容

(一)要解决的技术问题

为了克服现有技术不足，现提出一种非抗体依赖的循环肿瘤细胞检测方法，以解决上述背景技术提出的问题，通过采用结合特定性来精准确定循环肿瘤细胞数量的有益效果。

(二)技术方案

本发明通过如下技术方案实现：本发明提出了一种非抗体依赖的循环肿瘤细胞检测方法，包括如下步骤：

步骤1、取适量检测者的外周血溶液，并去除红细胞及白细胞，再通过细胞过滤器进行去除红细胞及白细胞的杂质脱除，以此得到循环肿瘤细胞富集提取液；

步骤2、将步骤1处理后的富集提取液进行循环肿瘤细胞分离；

步骤3、将步骤2分离的循环肿瘤细胞置于至荧光电子显微镜的观位处，加入凝集素，静置一段时间，使得循环肿瘤细胞聚集；

步骤4、使用荧光电子显微镜获取观位处循环肿瘤细胞的分布图像；

步骤5、再由荧光电子显微镜配合病理图像分析系统，通过使用人工智能对病理图像中的细胞类型进行分类，并进行细胞量计数；

步骤6、若步骤5得到细胞量计数大时，再进行算出相同类型数量多的循环肿瘤细胞一种或多种，以确定循环肿瘤细胞的大致类型；

步骤7、将与步骤6一种或多种适配循环肿瘤细胞的抗体溶液，进行取适量置于步骤3的荧光电子显微镜的观位处当中与标记的循环肿瘤细胞进行混合，静置一段时间，所述抗体溶液的抗体：是以DNA分子为模板将具有超顺磁性质的磁纳米颗粒和能够特异性识别肿瘤细胞的DNA适配体组装形成；

步骤8、由荧光电子显微镜配合病理图像分析系统进行观察抗体溶液与标记的循环肿瘤细胞的结合情况，记录结合反应的数量，提高确定精度；

步骤9、定期重复步骤1～步骤8对检测者外周血溶液当中循环肿瘤细胞数量的变化检验，为确定癌症的是否性提供助力。