[发明专利]一种非抗体依赖的循环肿瘤细胞检测方法

权利要求书

1.一种非抗体依赖的循环肿瘤细胞检测方法，其特征在于：包括如下步骤：

步骤1、取适量检测者的外周血溶液，并去除红细胞及白细胞，再通过细胞过滤器进行去除红细胞及白细胞的杂质脱除，以此得到循环肿瘤细胞富集提取液；

步骤2、将步骤1处理后的富集提取液进行循环肿瘤细胞分离；

步骤3、将步骤2分离的循环肿瘤细胞置于至荧光电子显微镜的观位处，加入凝集素，静置一段时间，使得循环肿瘤细胞聚集；

步骤4、使用荧光电子显微镜获取观位处循环肿瘤细胞的分布图像；

步骤5、再由荧光电子显微镜配合病理图像分析系统，通过使用人工智能对病理图像中的细胞类型进行分类，并进行细胞量计数；

步骤6、若步骤5得到细胞量计数大时，再进行算出相同类型数量多的循环肿瘤细胞一种或多种，以确定循环肿瘤细胞的大致类型；

步骤7、将与步骤6一种或多种适配循环肿瘤细胞的抗体溶液，进行取适量置于步骤3的荧光电子显微镜的观位处当中与标记的循环肿瘤细胞进行混合，静置一段时间，所述抗体溶液的抗体：是以DNA分子为模板将具有超顺磁性质的磁纳米颗粒和能够特异性识别肿瘤细胞的DNA适配体组装形成；

步骤8、由荧光电子显微镜配合病理图像分析系统进行观察抗体溶液与标记的循环肿瘤细胞的结合情况，记录结合反应的数量，提高确定精度；

步骤9、定期重复步骤1～步骤8对检测者外周血溶液当中循环肿瘤细胞数量的变化检验，为确定癌症的是否性提供助力。

2.根据权利要求1所述的一种非抗体依赖的循环肿瘤细胞检测方法，其特征在于：所述步骤7当中具体操作流程为：当数量多的循环肿瘤细胞类型为一种时，则直接取适量的适配循环肿瘤细胞的处理溶剂与标记的循环肿瘤细胞进行混合；

当数量多的循环肿瘤细胞类型为多种时，则先取其中一种适量的适配循环肿瘤细胞的处理溶剂与标记的循环肿瘤细胞进行混合，预先进行步骤8的观察，再加入另外的适量的适配循环肿瘤细胞的处理溶剂，再次进行步骤8观察。

3.根据权利要求1所述的一种非抗体依赖的循环肿瘤细胞检测方法，其特征在于：所述步骤1去除红细胞采用非低渗溶破法。

4.根据权利要求1所述的一种非抗体依赖的循环肿瘤细胞检测方法，其特征在于：所述步骤1去除白细胞的具体操作为：先采用免疫磁珠法去除白细胞，再采用免疫毒素进一步杀死富集提取液中白细胞。

5.根据权利要求1所述的一种非抗体依赖的循环肿瘤细胞检测方法，其特征在于：所述步骤2循环肿瘤细胞分离的具体操作为：通过溶液荧光原位杂交的方式，即步骤1的富集提取液中的所有细胞直接进行DNA探针标记，并标记静置一段时间，对标记后的富集提取液利用流式细胞仪分离出循环肿瘤细胞。

6.根据权利要求1所述的一种非抗体依赖的循环肿瘤细胞检测方法，其特征在于：所述能够特异性识别肿瘤细胞的DNA适配体设置有多组。

7.根据权利要求1所述的一种非抗体依赖的循环肿瘤细胞检测方法，其特征在于：所述步骤7当中的适配循环肿瘤细胞的抗体溶液与标记的循环肿瘤细胞进行混合的静置时间为30秒以上。