[发明专利]一种同位素稀释质谱法定量检测游离DNA含量的方法

说明书

本发明属于生物技术领域，尤其涉及一种同位素稀释质谱法定量检测游离DNA含量的方法。首先公开了一种肽核酸探针，所述肽核酸探针中的核酸部分序列如SEQ ID NO：1所示，所述肽核酸探针中的肽部分序列如SEQ ID NO：2所示。还公开了一种同位素稀释质谱法定量检测游离DNA单链含量的方法包括：形成游离DNA‑生物素‑链霉亲和素磁珠复合物；加入肽核酸探针捕获所述游离DNA‑生物素‑链霉亲和素磁珠复合物；酶解；复溶；根据峰面积比间接计算样本中DNA含量；修正DNA浓度得到最终浓度值等步骤。本发明同位素稀释质谱法定量检测游离DNA单链含量的方法具有准确度高，结果可靠等优点。

技术领域

本发明属于生物技术领域，尤其涉及一种同位素稀释质谱法定量检测游离DNA含量的方法。

背景技术

目前，游离DNA单链定量检测方法主要包括聚合酶链反应法（PCR法）、分子杂交法、基因芯片法、DNA结合蛋白法等，其中使用最为广泛的为PCR法。但PCR法首先需要对游离DNA单链进行扩增，然后进行凝胶成像，需要耗费大量的时间和人力成本，结果易受各种因素的影响，而且不能绝对定量。

同位素稀释质谱法是一种新的游离DNA单链直接定量检测法，是目前公认的化合物准确定量的权威方法。该法利用质谱测定加入了同位素标记的待测物样品中标记与非标记待测物峰面积比值来间接计算待测物在样品中浓度，并根据生物素化效率、SPE回收率和酶解效率修正DNA定量结果，使检测结果准确可靠。该法相对于其他的测定方法具有特异性高、灵敏度高、定量结果准确可靠等优点。然而现有技术中的同位素稀释质谱法还存在分析速度和分析通量不高等问题，准备性也还有待提高。

发明内容

本发明要解决的技术问题是提供一种安全可靠的游离DNA单链含量测定的方法，本发明方法可以对血清样品中游离DNA单链含量直接进行测定。

具体的，本发明的技术方案如下：

本发明第一个方面公开了一种肽核酸探针，其中，所述肽核酸探针中的核酸部分序列如SEQ ID NO：1所示，所述肽核酸探针中的肽部分序列如SEQ ID NO：2所示；优选的，通过聚乙二醇连接所述核酸部分和肽部分得到肽核酸探针。

应当理解，与SEQ ID NO：1和SEQ ID NO：2序列具有90%以上（例如92%、95%和98%等）同源性，且功能相同的序列均在本发明的保护范围之内。

本发明第二个方面公开了上述的肽核酸探针在同位素稀释质谱法定量检测游离DNA单链含量方法中的应用。

本发明第三个方面公开了一种同位素稀释质谱法定量检测游离DNA单链含量的方法，包括：

S1：将合成的肽核酸探针配成溶液后，将合成的同位素标记多肽配成溶液作为内标；

S2：将生物素化的游离DNA单链与链霉亲和素磁珠反应，形成游离DNA-生物素-链霉亲和素磁珠复合物；

S3：加入肽核酸探针捕获所述游离DNA-生物素-链霉亲和素磁珠复合物，然后对所述游离DNA-生物素-链霉亲和素磁珠复合物进行酶解，将酶解产物固相萃取后复溶，定量检测；

S4：以不同浓度DNA标准品为横坐标，以肽核酸酶解肽段与同位素标记酶解肽段峰面积比为纵坐标建立标准曲线，根据二者峰面积比间接计算样本中DNA含量；

S5：修正DNA浓度得到最终浓度值。

应当理解，本发明中的方法并不限于上述步骤，在S1之前、S1与S2之间、S2与S3之间，S3与S4之间、S4与S5之间、S5之后，本领域技术人员可以根据需要，增加其他额外的步骤，且均在本发明的保护范围之内。