[发明专利]一种同位素稀释质谱法定量检测游离DNA含量的方法

权利要求书

1.一种肽核酸探针，其特征在于，其中，所述肽核酸探针中的核酸部分序列如SEQ IDNO：1所示，所述肽核酸探针中的肽部分序列如SEQ ID NO：2所示；优选的，通过聚乙二醇连接所述核酸部分和肽部分得到肽核酸探针。

2.根据权利要求1所述的肽核酸探针在同位素稀释质谱法定量检测游离DNA单链含量方法中的应用。

3.一种同位素稀释质谱法定量检测游离DNA单链含量的方法，其特征在于，包括：

S1：将合成的肽核酸探针配成溶液后，将合成的同位素标记多肽配成溶液作为内标；

S2：将生物素化的游离DNA单链与链霉亲和素磁珠反应，形成游离DNA-生物素-链霉亲和素磁珠复合物；

S3：加入肽核酸探针捕获所述游离DNA-生物素-链霉亲和素磁珠复合物，然后对所述游离DNA-生物素-链霉亲和素磁珠复合物进行酶解，将酶解产物固相萃取后复溶，定量检测；

S4：以不同浓度DNA标准品为横坐标，以肽核酸酶解肽段与同位素标记酶解肽段峰面积比为纵坐标建立标准曲线，根据二者峰面积比间接计算样本中DNA含量；

S5：修正DNA浓度得到最终浓度值。

4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，所述步骤S1之前还包括步骤S0：将合成的游离DNA单链配成系列浓度标准溶液，用于建立标准曲线。

5.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，在S1中，所述肽核酸探针中的核酸部分序列如SEQ ID NO：1所示，所述肽核酸探针中的肽部分和所述多肽的序列如SEQ ID NO：2所示。

6.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，在S1中，采用¹³C和¹⁵N双标所述多肽中的亮氨酸。

7.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，在S3中，加入序列修饰级胰蛋白酶对所述游离DNA-生物素-链霉亲和素磁珠复合物进行酶解，将酶解产物进行固相萃取，并用氮气吹干萃取物，而后将萃取物复溶；将复溶后样品进行HPLC-MS/MS定量检测。

8.根据权利要求7所述的方法，其特征在于，将复溶后样品采用岛津Nexera X2高效液相色谱系统和AB Sciex 5500三重四级杆液质联用仪进行定量检测。

9.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，在S1和S2之间还包括如下步骤：将游离DNA单链进行生物素化，并评定生物素化效率；优选的，在S5中，计算酶解效率、SPE回收率，并根据生物素化效率、酶解效率及SPE回收率修正DNA浓度。

10.根据权利要求3-9所述的方法在基因领域中的应用。