[发明专利]利用斑马鱼评价婴童化妆品眼刺激的方法

权利要求书

1.一种利用斑马鱼评价婴童化妆品眼刺激的方法，其特征在于，包括如下步骤：将发育至3天的斑马鱼胚胎暴露于含有婴童化妆品的胚胎培养液中，采用半静态培养法，在特定温度、周期性明暗环境下培养，待斑马鱼胚胎发育至6天时，对斑马鱼幼鱼的眼刺激、对光刺激的反应能力以及眼部发育相关基因的变异情况进行评价。

2.根据权利要求1所述的利用斑马鱼评价婴童化妆品眼刺激的方法，其特征在于：

其中，所述斑马鱼胚胎为野生斑马鱼AB品系胚胎。

3.根据权利要求1所述的利用斑马鱼评价婴童化妆品眼刺激的方法，其特征在于：

其中，进行暴露前，先配置不同浓度的待测婴童化妆品溶液，给药72h后，统计每组斑马鱼死亡情况，计算死亡率，选取死亡率小于5％且不会引起斑马鱼机体器官损伤的样品浓度作为待测样品安全浓度。

4.根据权利要求1所述的利用斑马鱼评价婴童化妆品眼刺激的方法，其特征在于：

其中，进行胚胎选择时，选取发育良好的，由斑马鱼繁殖发育至三天已孵化的胚胎进行暴露实验，每个培养皿中放置20个胚胎。

5.根据权利要求1所述的利用斑马鱼评价婴童化妆品眼刺激的方法，其特征在于：

其中，进行培养时，将培养容器置于恒温光控培养箱中，温度控制在28±1℃，光照与黑暗周期为14/10h，采取半静态培养法，每隔24h更换培养液，暴露时长为72h。

6.根据权利要求1所述的利用斑马鱼评价婴童化妆品眼刺激的方法，其特征在于：

其中，对斑马鱼幼鱼的眼刺激的指标包括眼部形态变化，测量虹膜带宽和瞳孔直径、并计算两者的比值；

对光刺激的反应能力指标包括计算黑暗中以及光照条件下特定时间段的平均速度、以及对应的运动距离；

眼部发育相关基因的变异评价的指标包括评价斑马鱼眼睛发育相关基因UNC45b、FOXC1、CHM的转录水平。

7.根据权利要求6所述的利用斑马鱼评价婴童化妆品眼刺激的方法，其特征在于：

其中，进行眼刺激的指标评价时，采用在体式显微镜下观察斑马鱼幼鱼眼部形态变化并拍照记录；然后利用Image J软件测量虹膜带宽和瞳孔直径，并计算两者的比值；

进行光刺激的反应能力评价时，包含如下步骤：

1)待斑马鱼胚胎在含有婴童化妆品的胚胎培养液中发育至6天后，清洗3遍，置于96孔板中，每孔一条鱼，每组至少10条鱼，放入斑马鱼行为轨迹跟踪系统中静置10min；

2)黑暗中静置5min后立即给予光刺激20s，每20s记录一次数据，以此循环重复3次；

3)计算黑暗中第280～300秒的平均速度、光照20s的平均速度，以及对应的运动距离，并跟踪记录各处理组幼鱼在黑暗条件下最后20s和光照条件下20s的游泳轨迹。

8.根据权利要求6所述的利用斑马鱼评价婴童化妆品眼刺激的方法，其特征在于：

其中，斑马鱼眼睛发育相关基因UNC45b、FOXC1、CHM的RT-PCR的引物序列如SEQ IDNO.1～6所示。

9.根据权利要求1所述的利用斑马鱼评价婴童化妆品眼刺激的方法，其特征在于：

其中，所述待测婴童化妆品包括含有失水山梨醇单水桂酸脂、酰基谷氨酸盐、环氧乙烷加成物、脂肪酸皂、十二烷基硫酸钠、油酸单甘油酯、聚氧乙烯蓖麻油中的任意一种或多种的化妆品。