[发明专利]人端粒长度检测试剂盒及非诊断目的的检测方法

说明书

本发明提供一种非诊断目的的人端粒相对长度检测方法，包括：提取待测样本基因组DNA，对待测样本基因组DNA和来自不少于3000个人的全血DNA混样标准品分别利用MMQPCR方法进行检测，并通过PCR反应收集T、S信号，基于标准曲线和待测样本基因组DNA的T/S比值计算得到待测样本的人端粒相对长度；PCR反应中以白蛋白基因作为内参基因并使用合适的引物，控制每10μL反应体系中含有10μM的telg引物0.36μL、10μM的telc引物0.36μL、10μM的albu引物0.06μL、10μM的albd引物0.06μL和1μL的待测样本DNA或标准品DNA。本发明还提供用于检测人端粒长度的试剂盒。本发明的检测方法和试剂盒检测准确性高、操作简便、需样量低，适用于大样本量的人群检测。

技术领域

本发明涉及分子生物学和医学检测技术领域，特别涉及一种人端粒相对长度检测试用试剂盒，及利用该试剂盒检测人端粒长度的非诊断目的的检测方法。

背景技术

目前，测定端粒长度的实验方法多种多样。其中，Southern Blot技术虽然是端粒长度测定领域的“金标准”，但由于该方法样本量需求大、操作复杂、实验繁琐、对实验员的技术要求较高；PCR定量法因操作便捷、测定时间短，可广泛应用于人群研究，但是大部分研究采用的是分别定量单拷贝基因和端粒基因，然后根据2^-ΔΔCT相对定量的方式来表示端粒相对长度；或者测定端粒(T)信号在一组反应、同一样本、但不同反应孔中单拷贝基因(S)信号，根据T/S比值与平均端粒长度成正比来达到定量的目的。

为了降低不同反应孔多次移液加样带来的系统误差，已有学者提出了改进的荧光定量PCR检测方法，在一组反应、同一反应孔中同时收集端粒(T)信号和单拷贝基因(S)信号。

即便如此，利用现有的荧光定量PCR检测端粒长度时，检测结果准确性仍然有待提高。因此有必要从多个方面优化用于检测端粒长度的荧光定量PCR方案，以显著提升其检测准确性。

发明内容

鉴于上述背景，本发明一方面的目的在于：提供一种优化的用于人端粒长度检测的荧光定量PCR检测方法。

本发明另一方面的目的在于：提供一种可以用于本发明上述人端粒长度检测方法的试剂盒。

本发明的上述目的通过以下技术方案实现：

首先，提供一种非诊断目的的人端粒相对长度检测方法，包括：提取待测样本基因组DNA，以来自不少于3000个人的全血DNA混合样品作为标准品，待测样本基因组DNA和标准品分别利用单色多重荧光定量PCR(MMQPCR)方法进行检测，并通过PCR反应收集端粒荧光信号(T)和单拷贝基因荧光信号(S)；其中，标准品以涵盖所述待测样本基因组DNA浓度的标准系列浓度进行检测，得到T/S比值标准曲线，基于所述标准曲线和待测样本基因组DNA检测得到的T/S比值计算得到待测样本的人端粒相对长度；

其中，MMQPCR方法检测的单拷贝基因为白蛋白(ALB)基因，作为内参基因；所述的PCR反应使用的引物序列如下：

本发明所述的检测方法中，所述标准品的标准系列浓度来自一个可涵盖所述待测样本基因组DNA浓度的浓度值范围，例如，该浓度值范围可以是从待测样本基因组DNA浓度的0.0625倍到10倍。检测时可以将所述标准品配制成该范围中相对均匀分布的一系列具体浓度，这一系列具体浓度中可以包含或不包含所述待测样本基因组DNA浓度；优选的方案中，为了提高标准曲线的参考性，所述的标准品的标准系列浓度取值由不少于5个数的等比数列构成，且大于和小于所述待测样本基因组DNA浓度的数值均不少于2个。