[发明专利]人端粒长度检测试剂盒及非诊断目的的检测方法

权利要求书

1.一种非诊断目的的人端粒相对长度检测方法，包括：提取待测样本基因组DNA，对待测样本基因组DNA和标准品分别利用单色多重荧光定量PCR(MMQPCR)方法进行检测，并通过PCR反应收集端粒荧光信号(T)和单拷贝基因荧光信号(S)；其特征在于：

所述的标准品是来自不少于3000个人的全血DNA混合样品；

将所述的标准品以涵盖所述待测样本基因组DNA浓度的标准系列浓度进行检测，得到T/S比值标准曲线，基于所述标准曲线和待测样本基因组DNA检测得到的T/S比值计算得到待测样本的人端粒相对长度；

其中，MMQPCR方法检测的单拷贝基因为白蛋白(ALB)基因，作为内参基因；所述的PCR反应使用的引物序列如下：

在所述的PCR反应中，将待测样本基因组DNA和不同浓度的标准品分别与扩增反应试剂混合形成反应体系进行扩增反应；其中，按体积百分比计，待测样本基因组DNA和标准品加入量分别占所述反应体系的5％～10％；所述的扩增反应试剂包括实时定量PCR扩增的预混合溶液、参比染料、端粒基因引物(telg、telc)、内参基因引物(albu、albd)及无菌无酶水；并控制每10μL的所述反应体系中含有10μM的telg引物0.36μL、10μM的telc引物0.36μL、10μM的albu引物0.06μL、10μM的albd引物0.06μL、1μL的待测样本DNA或标准品。

2.权利要求1所述的检测方法，其特征在于：所述涵盖所述待测样本基因组DNA浓度的标准系列浓度处于待测样本基因组DNA浓度的0.0625倍到10倍之间。

3.权利要求1或2任意一项所述的检测方法，其特征在于：所述的标准系列浓度取值由不少于5个数的等比数列构成，且大于和小于所述待测样本基因组DNA浓度的数值均不少于2个。

4.权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述的PCR反应程序设置如下：

Stage 1(hold stage)：1cycle：94℃15min；

Stage 2(PCR stage1)：2cycle：94℃15s；49℃15s；

Stage 3(PCR stage2)：40cycle:94℃15s；62℃10s；74℃30s-收集荧光(tel)；84℃10s；88℃30s-收集荧光(alb)。

5.权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述的标准品来源的人群年龄跨度为20～50岁。

6.一种用于检测人端粒长度的试剂盒，其中的试剂由标准品、引物、实时定量PCR扩增的预混合溶液、参比染料和无菌无酶水组成；其特征在于：所述的标准品是来自不少于3000个人的全血DNA混合样品；所述的引物由第一引物、第二引物、第三引物和第四引物组成；所述的第一引物为10μM的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示的端粒基因的上游引物，所述的第二引物为10μM的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示的端粒基因的下游引物，所述的第三引物为10μM的核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示的单拷贝基因(白蛋白)的上游引物，所述的第四引物为10μM的核苷酸序列如SEQ ID NO.4所示的单拷贝基因(白蛋白)的下游引物；所述的第一引物和第二引物的体积相同，均为所述第三引物或第四引物体积的至少6倍。

7.权利要求6所述的试剂盒，其特征在于：所述的实时定量PCR扩增的预混合溶液是内含反应缓冲液、GreenⅠ、dNTPs、Mg²⁺、rTaq DNA聚合酶及抗DNA聚合酶抗体的2×预混液。

8.权利要求6或7任意一项所述的试剂盒，其特征在于：所述的参比染料是50×ROXreference dye。

9.权利要求6或7任意一项所述的试剂盒，其特征在于：所述的实时定量PCR扩增的预混合溶液体积是所述的参比染料体积的至少500倍，优选900倍。