[发明专利]一种新型组蛋白去乙酰化酶抑制剂的定量分析方法

说明书

本发明揭示了一种新型组蛋白去乙酰化酶抑制剂的定量分析方法，包括步骤：S1.通过蛋白沉淀法前处理血浆，具体为：取适量人血浆样品，加入内标和有机溶剂后剧烈涡旋以沉淀蛋白质，然后经离心分离含待测CYD‑910的上清液，经稀释后进样于分析柱中，与潜在的机制干扰物分离；S2.用液相色谱串联三重四级杆质谱仪进行质谱分析。本发明为首次针对在研新型组蛋白去乙酰化酶抑制剂抗肿瘤药物CYD‑910建立的血浆浓度生物分析方法，灵敏度高，选择性特异性好，方法操作简便，易于自动化作业；且分析时间仅3.5分钟，通量高；另外操作中有机溶剂使用量较少，在节省成本的同时有利于环保。

技术领域

本发明涉及生物分析技术领域，特别涉及一种新型组蛋白去乙酰化酶抑制剂的定量分析方法，尤其是一种新型组蛋白去乙酰化酶抑制剂抗肿瘤药物CYD-910的液相色谱串联质谱(LC-MS/MS)分析方法。

背景技术

基因的表达调控异常是肿瘤发生的关键机制之一。组蛋白去乙酰化酶(HDACs)介导的组蛋白乙酰化是表观遗传修饰的一种重要形式。当机体受到外因或内因的影响，HDACs过度表达，降低组蛋白乙酰化水平，致使原有的影响细胞增殖和调控细胞周期的基因表达失衡，导致代谢紊乱，进而引发肿瘤或其他疾病。在多种肿瘤细胞样本中，均发现HDACs的过度表达并被转录因子不正常募集的现象。因此，抑制HDACs水平能够有效促进肿瘤细胞分化及凋亡。

组蛋白去乙酰化酶抑制剂(HDACi)通过抑制HDACs的活性，促进一些特异性的基因表达，再经过对细胞周期循环的阻滞、促进细胞分化和凋亡、抑制DNA损伤后修复、抗血管生成等一系列的作用机制，达到抑制肿瘤的效果。目前，已有5个HDACi被FDA或NMPA批准用于多种肿瘤的治疗。其中，仅西达本胺属于选择性I类HDACi，而其它4款药皆为泛HDACi。此外，另一个I类选择性HDACi药物Entinostat(MS-275)已进入III期临床试验研究。从现有数据总结，具有较高亚型选择性的HDACi均表现出其较优的代谢稳定性和口服生物利用度，从而具有更低的毒副作用。

本发明中涉及的新型组蛋白去乙酰化酶抑制剂抗肿瘤药物CYD-910即为在研的新型I类选择性HDACi药物，其结构尚未公开，与已有药物相比活性更高，有较高亚型选择性，而对其精准的定量分析则是CYD-910药物研发中重要的一个方面。

发明内容

本发明的目的旨在提出一种人血浆中新型组蛋白去乙酰化酶抑制剂抗肿瘤药物CYD-910的高灵敏度的定量分析方法，为该新药研发提供支持。

本发明实现上述目的的技术解决方案是，一种新型组蛋白去乙酰化酶抑制剂的定量分析方法，包括步骤：

S1.制备样品：通过蛋白沉淀法对血浆做前处理，得到含CYD-910的有机溶剂混合液；其中，所述蛋白沉淀法包括步骤：S11.取适量人血浆，加入内标溶液；S12.再加入有机溶剂剧烈涡旋后离心；S13.取上清液稀释后进样分析柱中；

S2.定量分析：用液相色谱串联三重四级杆质谱仪进行质谱分析。

优选地，所述蛋白沉淀法的步骤S11中，人血浆用量为50μL，内标为西达本胺，加入内标溶液为含西达本胺的乙腈溶液。

优选地，所述蛋白沉淀法的步骤S12中，所述有机溶剂为乙腈

优选地，所述蛋白沉淀法的步骤S13中，上清液稀释使用的溶液为纯水。

优选地，步骤S2中，液相色谱条件为：色谱柱为Agilent XDB-C183.5μm，2.1×50mm；柱温40℃；进样器温度4℃；流动相A为含0.1％甲酸的5mM醋酸胺水溶液，B为含0.1％甲酸的乙腈；梯度洗脱(0-0.5min，流动相B为30％；0.5-1.5min，流动相B由30％升高到95％；1.5-2min，流动相B为95％；2.1-3.5min，流动相B为30％)；流速为0.5mL/min，进样量5μL，分析时间3.5分钟。