[发明专利]一种人血浆中紫杉醇的定量分析方法

说明书

本发明公开了一种人血浆中紫杉醇的定量分析方法，包括步骤：S1.通过固相萃取法前处理血浆样品并富集血样中紫杉醇；S2.使用液相色谱串联质谱进行分析，并通过内标法建立标准曲线计算人血浆样品中的紫杉醇浓度；其中，S1中，先使用酸溶液对血样进行pH调节并加入内标后，采用C18固相萃取填料对目标物进行富集，再使用有机溶剂洗脱经富集的紫杉醇并在氮气下吹干，最后使用有机溶剂混合液将紫杉醇复溶。本方法灵敏度高(可达1.00ng/mL)，在具有高通量、快捷性的同时，还具有提取回收率高、无基质效应影响的优点，可应用于临床上各种紫杉醇制剂的血药浓度分析检测。

技术领域

本发明涉及一种人血浆中紫杉醇的定量分析方法，属于生物分析技术领域。本发明的方法采用固相萃取结合液相色谱串联质谱法(LC-MS/MS)对人血浆中紫杉醇浓度进行测定。本发明可用于癌症患者注射紫杉醇制剂后紫杉醇浓度的测定。

背景技术

紫杉醇是短叶紫杉或红豆杉的树皮中提取的成分，属于细胞毒类抗肿瘤药物，临床上常用于卵巢癌、乳腺癌和非小细胞肺癌的一线治疗，此外还用于前列腺癌、头颈癌、食管癌、胃癌、膀胱癌、恶性黑色素瘤、恶性淋巴瘤等多种癌症的治疗。

目前临床使用的紫杉醇制剂主要有三种类型，包括紫杉醇注射液、紫杉醇脂质体、紫杉醇白蛋白结合型。由于紫杉醇水溶性差，为了增加其水溶性，紫杉醇注射液中需加入聚氧乙烯蓖麻油和无水乙醇以改善其在水中的溶解性，这些添加物常常引起严重的过敏反应。紫杉醇脂质体是将紫杉醇包封在类脂质双分子层而形成的微型泡囊体。紫杉醇白蛋白结合型是以人白蛋白作为药物载体与稳定剂。临床中多种紫杉醇制剂类型的使用为血样中紫杉醇浓度的准确定量分析提出了更高要求。

发明内容

本发明的目的旨在提供一种采用固相萃取技术对人血浆样品中的紫杉醇进行富集，并联合液相色谱串联质谱进行定量检测的方法。

为实现上述目的，本发明提供了一种人血浆中紫杉醇的定量分析方法，该方法包括以下步骤：

S1.通过固相萃取法前处理血浆样品并富集血样中紫杉醇：取待测血样，加入酸溶液进行酸化，并加入内标溶液，混匀后通过固相萃取装置，经过多步淋洗后用含甲酸有机溶剂洗脱，得到含紫杉醇的洗脱液，并经过氮气吹干后使用有机溶剂混合液复溶后进样；

S2.使用液相色谱串联质谱进行分析，计算紫杉醇与内标峰面积比值，并通过内标法建立标准曲线计算人血浆样品中的紫杉醇浓度。

优选地，步骤S1中，血浆样品体积为100μL；

优选地，步骤S1中，所述酸溶液为含1％甲酸的水溶液；

优选地，步骤S1中，所述固相萃取装置的填料为HLB-C18；固相萃取方式为96孔固相萃取样品板；

优选地，步骤S1中，所述内标溶液为含有内标多西他赛的50％甲醇溶液；

优选地，步骤S1中，所述多步淋洗包括含1％甲酸的水溶液和含0.1％甲酸的50％甲醇溶液；

优选地，步骤S1中，所述用于洗脱的含甲酸有机溶剂为含0.1％甲酸的甲醇溶液；

优选地，步骤S1中，所述用于复溶的有机溶剂混合液为含0.1％甲酸的40％乙腈溶液。

优选地，步骤S2中，液相色谱条件：色谱柱为Waters XTERRA MS C185μm，2.1×50mm；柱温40℃；进样器温度4℃；流动相A为含0.1％甲酸的水，B为含0.1％甲酸的乙腈；梯度洗脱(0-0.5min，流动相B为40％；0.5-2.2min，流动相B由40％升高到65％；2.2-2.21min，流动相B由65％升高到95％；2.21-2.7min，流动相B为95％；2.71-3.5min，流动相B为40％)；流速为0.6mL/min，进样量5μL。