[发明专利]用于提高微生物法制备3-羟基丙酸产率的诱导剂

权利要求书

1.一种提高微生物法制备3-羟基丙酸产率的方法，其特征在于，包括以下步骤：

将重组汉逊德巴利酵母接种液体培养基培养16-20h得到种子液；再将种子液按照体积分数6.8-10%接入新鲜的液体培养基，并在所述液体培养基中添加质量分数为45-55%餐厨废弃油脂和0.05-0.12%维生素B12，扩大培养5-7天，获取发酵液；其中，所述的餐厨废弃油脂均分为两份，在培养0h和72h时分别加入；

检测所得发酵液中的3-羟基丙酸含量；

所述重组汉逊德巴利酵母的制备包括以下步骤：

将3-磷酸甘油脱氢酶基因gpd1导入质粒pET-28a，构建pSE-gpd1，再将3-磷酸甘油酯酶基因hor2连接到pSE-gpd1，构建pSE-gpd1- hor2，然后将其转染大肠杆菌，并在35-37℃摇瓶发酵培养16-20h，得到重组大肠杆菌；

将汉逊德巴利酵母在30-32℃摇瓶发酵培养16-20h，然后将所述汉逊德巴利酵母与所述重组大肠杆菌菌液等体积混合，30-32℃培养25-30min后涂布在含有氨苄青霉素和卡那霉素的LB平板上培养20-25h以进行接合转化，挑取单克隆进行鉴定，得到转入pSE-gpd1-hor2的重组汉逊德巴利酵母；

所述液体培养基包括葡萄糖10-15g/L、酵母浸膏3-5g/L、（NH₄）₂SO₄ 5-10g/L、KH₂PO₄2.0-3.0g/L、MgSO₄·7H₂O1.5-2.3g/L、FeSO₄·7H₂O 0.01-0.02g/L；

培养方式采用间歇式转动培养，在0-24h内采用80-120r/min转动方式培养，之后停止转动20-30min，再继续采用130-160r/min转动方式培养，持续转动至第90h，之后停止转动20-30min，再继续采用80-120r/min转动方式培养至发酵结束；

所述汉逊德巴利酵母，保藏编号为CGMCC No.11893。

2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，还包括在发酵72h时补充葡萄糖的步骤，按照葡萄糖：液体发酵培养基为10.0g-23.5g：1L的配比补充。