[发明专利]检测可卡因的胶体金试纸条、制备方法及测试可卡因的方法

说明书

本发明提供了检测可卡因的胶体金试纸条、制备方法及测试可卡因的方法，包括：依次搭接的样品垫、金标垫、反应膜及吸水垫；金标垫固定有第一核酸适配体片段与纳米金的偶联物，第一核酸适配体片段的分子结构为5’‑X1‑DNA1‑Y1‑3’，反应膜设置有检测线及质控线，检测线固定有第二核酸适配体片段及标记结合物，第二核酸适配体片段的分子结构为5’‑X1‑DNA2；DNA1与DNA2为包括可结合可卡因特异性位点的核酸片段，DNA1及DNA2均与可卡因结合后形成以可卡因分子为中心的三草叶型发夹结构。本发明的有益效果在于：采用各含有一部分与可卡因特异性结合的第一核酸适配体片段与第二核酸适配体片段制备成夹心型胶体金测试纸条，检测快速，特异性强，灵敏度高。

技术领域

本发明属于生物检测技术领域，具体涉及检测可卡因的胶体金试纸条、制备方法及测试可卡因的方法。

背景技术

可卡因(cocaine)是当今世界滥用最为广泛的毒品之一，其是由芽子碱的羧基甲醇脂和羟基苯甲酸酯构成的双酯型生物碱，化学名苯甲酰甲基芽子碱(Benzoyl MethylEcgonine，BME)，分子式为C₁₇H₂₁NO₄，分子量为303。可卡因纯品是一种白色晶体，熔点为98℃，难溶于水，易溶于有机溶剂中。可卡因对人体的消化系统、免疫系统、心血管系统和泌尿生殖系统都有损伤作用。尤其作为一种剂量依赖性肝毒素，可导致肝细胞大量坏死，表现为血清中ALT、AST、胆红素的升高，病理变化包括局部坏死、炎性浸润、脂肪变性等]。人经口摄入纯可卡因0.5-1g(过敏者口服30mg)就会中毒致死，通过肌肉注射或黏膜用药30mg会中毒致死(致死血浓度0.9-21mg/L)。

目前，可卡因的检测方法主要有高效液相色谱法(HPLC)、液相色谱-质谱联用法(LC-MS)、气相色谱-质谱联合法(GC-MS)、溶剂微萃取-在线反萃取-场放大进样-毛细管电泳-紫外检测法(SME-OLBE-FASI-CE-UV)和直接实时电离飞行时间质谱法(DART-TOF-MS)等。上述方法虽然具有较高的灵敏度和精密度，但需要昂贵的仪器、设备和经过专门培训的技术人员，不能实现现场大规模即时检测。因此会出现送样延迟、检材储存不当等原因，造成样本无法实现第一时间的准确检测。

核酸适配体(aptamer)是一种可以通过指数富集的配体系统进化技术(Systematic Evolution of Ligands by Exponential Enrichment，SELEX)在体外筛选获得的具有较低碱基数(10-80)的单链寡核苷酸分子(ssDNA或RNA)。核酸适配体具有短序列折叠而形成独特的三维构型，例如发卡、茎环、凸环、三叶草和假结等结构。这些高度结构化的核酸适配体基于范德华力、氢键和疏水作用等能够紧密地结合靶标分子。相比较于抗体，核酸适配体具有靶标范围广、分子量小、无免疫原性、稳定性高、制备周期短、易于修饰等优点。因此，核酸适配体在毒品检测、环境分析、重金属检测、临床诊断鉴定、食品安全快速检测和疾病治疗等方面都有广泛的应用。在针对可卡因的核酸适配体检测方面，曾立波在特异性可卡因核酸适体测试条的研制中设计了一种胶体金试纸，该胶体金试纸条在检测线采用筛选出的核酸适配体，而在质控线上依旧采用了鼠抗BSA单抗，依旧存在抗体制备周期长、运输条件苛刻等缺点。因此，制备出一种更加快速、便捷的检测可卡因胶体金试纸条十分有必要。

发明内容

为解决上述技术问题，本发明提供一种检测可卡因的胶体金试纸条、制备方法及测试可卡因的方法。

具体技术方案如下：

一种检测可卡因的胶体金试纸条，其不同之处在于，包括：

依次搭接的样品垫、金标垫、反应膜及吸水垫；

所述金标垫固定有第一核酸适配体片段与纳米金的偶联物，所述第一核酸适配体片段的分子结构为5’-X1-DNA1-Y1-3’，其中，X1为标记物，Y1为可与纳米金进行偶联的基团；