[发明专利]检测可卡因的胶体金试纸条、制备方法及测试可卡因的方法

权利要求书

1.一种检测可卡因的胶体金试纸条，其特征在于，包括：

依次搭接的样品垫、金标垫、反应膜及吸水垫；

所述金标垫固定有第一核酸适配体片段与纳米金的偶联物，所述第一核酸适配体片段的分子结构为5’-X1-DNA1-Y1-3’，其中，X1为标记物，Y1为可与纳米金进行偶联的基团；

所述反应膜设置有检测线及质控线，所述检测线固定有第二核酸适配体片段及标记结合物，所述第二核酸适配体片段的分子结构为5’-X1-DNA2，其中，X1为标记物，所述质控线固定有标记结合物；所述标记物与所述标记结合物可进行特异性结合；

其中，DNA1与DNA2为包括可结合可卡因特异性位点的核酸片段，所述DNA1的核酸片段的序列如SEQ ID NO.2所示，所述DNA2的核酸片段的序列如SEQ ID NO.3所示，DNA1及DNA2均与可卡因结合后形成以可卡因分子为中心的三草叶型发夹结构；

所述X1选自生物素、荧光素、化学发光物或放射性物质中的一种；所述Y1为巯基；所述标记结合物选自亲和素或链霉亲和素中的一种。

2.根据权利要求1所述的检测可卡因的胶体金试纸条，其特征在于，所述纳米金的粒径为20 nm~40 nm。

3.权利要求1~2任一项所述的检测可卡因的胶体金试纸条的制备方法，其特征在于，包括：

步骤S1:设计DNA1片段与DNA2片段；

步骤S2:将胶体金溶液与所述第一核酸适配体片段依次经过偶联与陈化反应后进行固液分离，往固体中加入胶体金重悬液对其进行重悬，得到金标复合物重悬液；

步骤S3:将样品垫基体及金标垫基体分别采用样品处理液及重悬液处理；

步骤S4：将所述金标复合物重悬液固定于所述金标垫基体，在所述反应膜上分别进行所述检测线及质控线的划置；

步骤S5：将所述样品垫、所述金标垫、所述反应膜及所述吸水垫依次搭接于底板上，得到所述胶体金试纸条。

4.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于，所述步骤S1中，将选取的核酸适配体进行截断，得到所述DNA1与所述DNA2；所述核酸适配体包括可与可卡因结合的特异性位点，在特异性位点与可卡因结合后，形成以可卡因分子为核心的三草叶型发夹结构；在所述核酸适配体远离其特异性位点的位置进行截断，得到各有一部分可结合可卡因的特异性位点的DNA1与DNA2。

5.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于，所述核酸适配体的序列如SEQ.ID.NO.1所示。

6.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于，所述重悬液包括：0.06%w/v~1.2%w/v牛血清蛋白、1.5w/v~2.2%w/v蔗糖、0.20%w/v~0.30%w/v吐温-20、0.015%~0.025%叠氮化钠及0.008 M~0.012 M磷酸缓冲盐溶液；所述样品处理液为包括2.5%w/v~3.2%w/v牛血清蛋白、0.03%w/v~0.06%w/v吐温-20及0.008 M~0.012 M磷酸缓冲盐溶液。

7.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于，所述步骤S2中，还包括胶体金溶液的制备，将去离子水和氯金酸溶液混合均匀后，加热至溶液开始轻微沸腾，将柠檬酸钠溶液一次性加入，继续加热至颜色变红且不再变化时，使溶液保持沸腾状态继续加热5 min~15min，静置冷却至室温。

8.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于，所述步骤S4中，将所述第二核酸适配体片段与标记结合物溶液孵育，反应后作为T线划线液；用标记结合物溶液混合作为C线划线液；采用所述T线划线液及所述C线划线液在所述反应膜上进行划线，得到所述检测线与所述质控线。

9.一种可卡因的检测方法，其特征在于，包括：

将测试样品滴加在权利要求1~2任一项所述的检测可卡因的胶体金试纸条进行反应，观察所述检测线与所述质控线的信号变化情况。

10.根据权利要求9所述的检测方法，其特征在于，包括：

若所述检测线与所述质控线均出现红线，则样品中存在可卡因；若所述检测线未出现红线，而所述质控线出现红线，则样品中不存在可卡因；若质控线均未出现红线，则检测结果无效。