[发明专利]曲格列酮在抗结核分枝杆菌药物中的应用

说明书

本发明公开了曲格列酮在抗结核分枝杆菌药物中的应用，包括以下步骤：THP‑1巨噬细胞的分化：利用PMA对THP‑1细胞进行诱导分化，然后加入曲格列酮进行培养；结核分枝杆菌的感染：结核分枝杆菌按MOI=10感染细胞，然后进行清洗，加入培养基进行继续培养；涂板计数:感染一段时间后，对细胞进行裂解，然后再进行梯度稀释涂板，再进行长时间培养，然后得到细菌存活数量。本申请测定了结核分枝杆菌强毒株H37Rv感染巨噬细胞后，曲格列酮在细胞内的抗结核分枝杆菌活性，结果显示曲格列酮显著增强巨噬细胞对结核分枝杆菌的清除作用，具有良好的开发价值。

技术领域

本发明涉及生物医学医药领域，尤其涉及曲格列酮在抗结核分枝杆菌药物中的应用。

背景技术

结核特别是耐药结核是当前结核病治疗的重点和难点，宿主定向治疗是当今耐药结核病研究领域的热点，其核心理念是通过干预宿主基因功能来增强保护性免疫应答或抑制过度炎症反应来治疗耐药结核病。在深入认识宿主抗结核免疫特征和调节机制的基础上，研发免疫治疗或更广义的基于宿主基因定向治疗结核病新策略为结核病治疗，尤其是克服耐多药结核提供了新的愿景。

发明内容

针对上述技术中存在的不足之处，本发明提供一种利用曲格列酮对抗结核分枝杆菌的抑制方法，测定了结核分枝杆菌强毒株H37Rv感染巨噬细胞后，曲格列酮在细胞内的抗结核分枝杆菌活性，结果显示曲格列酮具有明显的抗结核分枝杆菌活性，显著增强巨噬细胞对结核分枝杆菌的清除；首次发现了曲格列酮抗结核分枝杆菌的新功能，是一个潜在的靶向宿主的抗结核药物。

为实现上述目的，本发明提供曲格列酮在抗结核分枝杆菌药物中的应用，其特征在于，包括以下步骤：

THP-1巨噬细胞的分化：利用PMA对THP-1细胞进行培养分化，然后加入曲格列酮进行培养；

结核分枝杆菌的感染：结核分枝杆菌按MOI＝10感染细胞，然后进行清洗，加入含曲格列酮的培养基进行继续培养；

图板计数:感染一段时间后，对细胞进行裂解，然后再进行稀释倍数涂板，再进行长时间培养，然后得到细胞存活数量。

作为优选，曲格列酮的分子式为C₂₄H₂₇NO₅S，相对分子质量为441.54，其结构式为：

作为优选，在THP-1巨噬细胞的分化步骤中，首先采用含10％胎牛血清的1640培养基在37℃，5％CO₂的细胞培养箱中培养，96孔板按每孔5×10⁴个细胞数铺板，加入终浓度100ng/ml的PMA刺激过夜，使其分化为巨噬细胞，24h后更换为完全培养基。

作为优选，将诱导分化的巨噬细胞继续培养24h后加入不同浓度的曲格列酮，在37℃，5％CO₂继续培养48h，利用cck-8试剂盒检测细胞活性。

作为优选，曲格列酮的浓度分别为5μM、10μM、20μM、30μM、50μM、60μM、70μM、80μM和100μM。

作为优选，将THP-1细胞诱导为巨噬细胞后，在感染前1h加入曲格列酮进行预处理，结核分枝杆菌H37Rv按MOI＝10感染细胞，然后采用PBS进行清洗，加入1640完全培养基在37℃，5％CO₂继续培养，在此过程中一直维持曲格列酮的添加。

作为优选，在涂板技术步骤中，将感染24、48、72小时后，用0.025％的SDS裂解细胞，分别按10^-2、10^-3稀释倍数涂板，37℃细菌培养箱培养约三周计数。