[发明专利]曲格列酮在抗结核分枝杆菌药物中的应用

权利要求书

1.曲格列酮在抗结核分枝杆菌药物中的应用，其特征在于，包括以下步骤：

THP-1巨噬细胞的分化：利用PMA对THP-1细胞进行培养分化，然后加入曲格列酮进行培养；

结核分枝杆菌的感染：结核分枝杆菌按MOI＝10感染细胞，然后进行清洗，加入培养基进行继续培养；

涂板计数:感染一段时间后，对细胞进行裂解，然后再进行梯度稀释涂板，再进行长时间培养，然后得到细胞存活数量。

2.根据权利要求1所述的曲格列酮在抗结核分枝杆菌药物中的应用，其特征在于，曲格列酮的分子式为C₂₄H₂₇NO₅S，相对分子质量为441.54，其结构式为：

3.根据权利要求1所述的曲格列酮在抗结核分枝杆菌药物中的应用，其特征在于，在THP-1巨噬细胞的分化步骤中，首先采用含10％胎牛血清的1640培养基在37℃，5％CO₂的细胞培养箱中培养，96孔板按每孔5×10⁴个细胞数铺板，加入终浓度100ng/ml的PMA刺激过夜，使其分化为巨噬细胞，24h后更换为完全培养基。

4.根据权利要求3所述的曲格列酮在抗结核分枝杆菌药物中的应用，其特征在于，将诱导分化的巨噬细胞继续培养24h后加入不同浓度的曲格列酮，在37℃，5％CO₂继续培养48h，利用cck-8试剂盒检测细胞活性。

5.根据权利要求4所述的曲格列酮在抗结核分枝杆菌药物中的应用，其特征在于，曲格列酮的浓度分别为为5μM、10μM、20μM、30μM、50μM、60μM、70μM、80μM和100μM。

6.根据权利要求1所述的曲格列酮在抗结核分枝杆菌药物中的应用，其特征在于，将THP-1细胞诱导为巨噬细胞后，在感染前1h加入曲格列酮进行预处理，结核分枝杆菌H37Rv按MOI＝10感染细胞，然后采用PBS进行清洗，加入1640完全培养基在37℃，5％CO₂继续培养，在此过程中一直维持曲格列酮的添加。

7.根据权利要求1所述的曲格列酮在抗结核分枝杆菌药物中的应用，其特征在于，在涂板技术步骤中，将感染4、24、48、72小时后，用0.025％的SDS裂解细胞，分别按10^-2、10^-3稀释倍数涂板，37℃细菌培养箱培养约三周计数。