[发明专利]清除RANKL的细胞膜包被纳米诱饵、其制备及应用

说明书

本申请提供了一种清除核因子κB受体活化因子配体(RANKL)的细胞膜包被纳米诱饵、其制备及应用。具体而言，本申请提供了一种纳米诱饵，其包括：(a)纳米核；和(b)包被所述纳米核的破骨前体细胞细胞膜。所述纳米诱饵可为RAW‑PLGA，其中RAW细胞膜为破骨前体细胞的细胞膜，PLGA为纳米核。本申请还提供了该纳米诱饵的制备方法及其应用，尤其是在治疗破骨细胞过多或功能亢进相关的疾病(如骨质疏松症)中的应用。本申请中的纳米诱饵可有效地清除骨质疏松症中高表达的RANKL，同时能够从巨噬细胞捕获中逃脱并且在全身施用后具备长时间的血液循环，在骨质疏松症的临床治疗中具有极大的潜力。

技术领域

本申请属于生物材料和医学领域。具体而言，本申请涉及细胞膜包被技术，更具体涉及破骨细胞膜包被的纳米复合物，其能有效结合并清除高表达的RANKL。

背景技术

骨质疏松症是一种进行性骨骼疾病，其特征在于骨矿物质密度和质量的下降、骨微观结构的破坏和骨脆性的增加。对于女性来说，由雌激素缺乏引起的绝经后骨质疏松症是最常见的类型，大约50％的女性在绝经后至少经历一次骨折。在绝经期妇女中，雌激素缺乏导致RANKL上调，其通过与破骨前体细胞的RANK结合进一步激活核因子-κB(NF-κB)途径，从而上调c-Fos基因表达。此外，RANKL通过启动一系列信号分子如p38，ERK和JNK的磷酸化来激活丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)途径。两种途径的激活都会导致单核细胞分化为破骨细胞，并启动基质金属蛋白酶(MMP)和碱性磷酸酶(ALP)等基因的转录程序，最终促进骨吸收并诱导骨质流失。

在临床上，骨保护素(OPG)和抗体如地诺单抗(Denosumab)已被广泛应用于清除RANKL来抑制绝经后骨质疏松。然而，现有RANKL抑制剂(主要是蛋白质药物)经常因其血液循环时间短、生物分布不理想、制造工艺复杂和抗体抗性等缺点而应用有限。

破骨细胞(Osteoclast，OC)是骨吸收的主要功能细胞，在骨发育、生长、修复、重建中具有重要的作用。破骨细胞起源于血系单核-巨噬细胞系统，是一种特殊的终末分化细胞，它可由其单核前体细胞通过多种方式融合形成巨大的多核细胞。破骨细胞的分离培养始于20世纪80年代，到2018年7月，破骨细胞的培养方法主要有：骨髓机械分离法，骨髓细胞诱导法，脾干细胞诱导法，血液单核细胞诱导法，小鼠RAW 264.7细胞系诱导法及骨巨细胞瘤分离法。

破骨细胞以其骨质吸收功能为人所知晓。而且作为骨组织成分的一种，行使骨吸收(bone resorption)的功能。破骨细胞与成骨细胞(osteoblast，亦称bone-formingcells)在功能上相对应。二者协同，在骨骼的发育和形成过程中发挥重要作用。除此之外，破骨细胞还具有其他的生物学作用。例如造血调控作用、骨形成调控作用、骨内血管生成调控作用、骨钙素的激素作用。破骨细胞功能异常会造成骨质吸收的异常，若其功能亢进，会引起骨退行性病变如骨质疏松症、癌症的骨转移、关节炎等；若其功能障碍或衰退，会造成骨硬化症、致密性成骨不全、变形性骨炎、大块骨溶解病等。

破骨细胞信号通路的研究为研制靶向阻断破骨细胞分化和功能的新药提供了新方向：RANKL参与了骨髓瘤、骨大细胞癌等疾病中破骨细胞的形成分化过程，通过阻断RANK/RANKL通路可阻止破骨细胞的分化过程，防止骨吸收、维持骨密度、降低骨折风险。

因此，本领域中亟需研发一种新型的更安全和更有效的药物用于预防或治疗与破骨细胞RANKL通路相关的疾病，尤其是骨质疏松症(例如绝经后骨质疏松症)。

发明内容

本申请正是提供了一种纳米复合物，其能有效结合并清除高表达的RANKL，同时能够从巨噬细胞捕获中逃脱，在全身施用后具备长时间的血液循环，在RANKL过表达相关疾病(尤其是骨质疏松症)的临床治疗中具有极大的潜力。

在本申请的第一方面中，提供了一种纳米诱饵，其包括：(a)纳米核；和(b)包被所述纳米核的破骨前体细胞细胞膜。