[发明专利]一株高产Xcn1的嗜线虫致病杆菌及其应用有效
| 申请号： | 202111147912.8 | 申请日： | 2021-09-29 |
| 公开（公告）号： | CN113881615B | 公开（公告）日： | 2022-05-31 |
| 发明（设计）人： | 李广悦;秦有才;杨秀芬;任杰;曾洪梅;袁京京 | 申请（专利权）人： | 中国农业科学院植物保护研究所 |
| 主分类号： | C12N1/21 | 分类号： | C12N1/21;C12N15/31;C12N15/74;C12N15/70;C12P17/06;C12R1/01 |
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| 地址： | 100193 *** | 国省代码： | 北京;11 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 高产 xcn1 线虫 致病 杆菌 及其 应用 | ||
1.一株高产Xcn1的嗜线虫致病杆菌在发酵生产Xcn1中的应用，其特征在于，所述高产Xcn1的嗜线虫致病杆菌在LB培养基发酵培养得到的Xcn1产量达到782mg/L，并且不产生Xcn2；高产Xcn1的嗜线虫致病杆菌采用如下方法构建得到：采用大肠杆菌-嗜线虫致病杆菌穿梭克隆载体pJQ200sk为骨架构建基因敲除载体，先构建获得xcnM敲除质粒，采用引物pJQ-infusion-F如SEQ ID No.1所示、pJQ-infusion-R如SEQ ID No.2所示，将pJQ200sk质粒通过PCR方式进行线性化，上游同源臂PCR扩增引物xcnM-5DT如SEQ ID No.3所示、xcnM-P1如SEQ ID No.4所示，下游同源臂PCR扩增引物xcnM-3DT如SEQ ID No.5所示、xcnM-P2如SEQ ID No.6所示，上游同源臂和下游同源臂PCR扩增模板是嗜线虫致病杆菌CB6基因组；然后将获得的敲除质粒转化到大肠杆菌S17-1λpir中，将大肠杆菌S17-1λpir与嗜线虫致病杆菌CB6共培养进行结合转移，涂布在筛选平板上，获得xcnM敲除阳性克隆；然后将xcnA启动子替换为来源于嗜线虫致病杆菌CB6自身表达强度更高的启动子Promoter-g3509，所述启动子Promoter-g3509的序列如SEQ ID No.15所示；在启动子promoter-g3509序列后面接一段核糖体结合位点RBS序列如SEQ ID No.16所示。
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