[发明专利]早筛或预后监测膀胱癌的引物探针组合物、试剂盒及系统

说明书

本发明公开了一种用于早筛或预后监测膀胱癌的引物探针组合物、试剂盒及系统。该引物探针组合物包括：RASSF1A基因的引物对F1、R1和探针P1，F1、R1和P1的核苷酸序列依次如SEQ ID NO.1～3所示；TWIST1基因的引物对F2、R2和探针P2，F2、R2和P2的核苷酸序列依次如SEQ ID NO.4～6所示；ZNF154基因的引物对F3、R3和探针P3，F3、R3和P3的核苷酸序列依次如SEQ ID NO.7～9所示。本发明具有较高的检测准确度，适用于膀胱癌的预防早筛和预后监测。

技术领域

本发明属于膀胱癌检测试剂盒领域，涉及一种用于早筛或预后监测膀胱癌的引物探针组合物、试剂盒及系统，特别是一种基于甲基化荧光定量PCR的膀胱癌检测试剂盒。

背景技术

膀胱癌是尿路系统最常见的恶性肿瘤，每年世界有新发病例549,393例，死亡人数199,922例。大约75％的病人是非肌层浸润性膀胱癌，并且70％的肿瘤会复发。非肌层浸润性膀胱癌会经历反复治疗和检测，导致膀胱癌会产生终生治疗费用。

目前，膀胱癌检测的金标准是膀胱镜检查和尿液细胞学筛查。膀胱镜检查高度敏感，但有侵入性，昂贵，且常伴有不适，而尿细胞技术特异性高，但缺乏敏感性(25％-35％)，尤其低等级膀胱癌(4％-15％)。FISH的灵敏度为60％-80％，广泛用于膀胱癌的临床诊断。但是在低级别或者小的肿瘤上的灵敏度更低。

所以，迫切需要开发一种有效的检测方法可以检测早期、低级别、残留和复发肿瘤，来提高疾病的控制效率。

实时荧光定量PCR(Quantitative Real-time PCR)是一种在DNA扩增反应中，以荧光化学物质测每次聚合酶链式反应(PCR)循环后产物总量的方法。通过荧光信号，对PCR进程进行实时检测。由于在PCR扩增的指数时期，模板的Ct值和该模板的起始拷贝数存在线性关系，所以成为定量的依据。荧光定量PCR技术现已被广泛用于各种临床疾病、动物疾病、食品安全及科学研究中。如对肿瘤标志物及瘤基因检测实现肿瘤疾病诊断，遗传基因检测实现对遗传病诊断。

目前虽已有将实时荧光定量PCR应用于膀胱癌诊断中，但其检测的准确度有待于进一步提高，不适于进行膀胱癌的预防早筛和预后监测。

发明内容

针对上述技术问题，本发明的目的是提供一种用于早筛或预后监测膀胱癌的引物探针组合物、试剂盒及试剂盒系统，其具有较高的检测准确度，适用于膀胱癌的预防早筛和预后监测。

根据本发明第一个方面，一种用于早筛或预后监测膀胱癌的引物探针组合物，其包括：

RASSF1A基因的引物对F1、R1和探针P1，F1、R1和P1的核苷酸序列依次如SEQ IDNO.1～3所示；

TWIST1基因的引物对F2、R2和探针P2，F2、R2和P2的核苷酸序列依次如SEQ IDNO.4～6所示；

ZNF154基因的引物对F3、R3和探针P3，F3、R3和P3的核苷酸序列依次如SEQ IDNO.7～9所示。

根据一优选的实施例，所述引物探针组合物还包括：

内参基因ATCB的引物对F4、R4和探针P4，F4、R4和P4核苷酸序列依次如SEQ IDNO.10～12所示。

根据一优选的实施例，所述探针的5’端标记有荧光报告基团，3’端标记有荧光淬灭基团。

根据本发明的第二个方面，一种用于早筛或预后监测膀胱癌的试剂盒，其包括第一核酸反应液，所述第一核酸反应液包括如上所述的引物探针组合物。

根据一优选的实施例，所述引物探针组合物还包括：

内参基因ATCB的引物对F4、R4和探针P4，F4、R4和P4核苷酸序列依次如SEQ IDNO.10～12所示。