[发明专利]早筛或预后监测膀胱癌的引物探针组合物、试剂盒及系统

权利要求书

1.一种用于早筛或预后监测膀胱癌的引物探针组合物，其特征在于，包括：

RASSF1A基因的引物对F1、R1和探针P1，F1、R1和P1的核苷酸序列依次如SEQ ID NO.1～3所示；

TWIST1基因的引物对F2、R2和探针P2，F2、R2和P2的核苷酸序列依次如SEQ ID NO.4～6所示；

ZNF154基因的引物对F3、R3和探针P3，F3、R3和P3的核苷酸序列依次如SEQ ID NO.7～9所示。

2.根据权利要求1所述的引物探针组合物，其特征在于，所述引物探针组合物还包括：

内参基因ATCB的引物对F4、R4和探针P4，F4、R4和P4核苷酸序列依次如SEQ ID NO.10～12所示。

3.根据权利要求1或2所述的引物探针组合物，其特征在于，所述探针的5’端标记有荧光报告基团，3’端标记有荧光淬灭基团。

4.一种用于早筛或预后监测膀胱癌的试剂盒，包括第一核酸反应液，其特征在于，所述第一核酸反应液包括如权利要求1所述的引物探针组合物。

5.根据权利要求4所述的试剂盒，其特征在于，所述引物探针组合物还包括：

内参基因ATCB的引物对F4、R4和探针P4，F4、R4和P4核苷酸序列依次如SEQ ID NO.10～12所示。

6.根据权利要求5所述的试剂盒，其特征在于，探针P1的5’端标记有FAM荧光报告基团，3’端标记有BHQ-1荧光淬灭基团；探针P2的5’端标记有VIC荧光报告基团，3’端标记有BHQ-1荧光淬灭基团；探针P3的5’端标记有CY5荧光报告基团，3’端标记有BHQ-2荧光淬灭基团；探针P4的5’端标记有ROX荧光报告基团，3’端标记有BHQ-2荧光淬灭基团。

7.根据权利要求4所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括第二核酸反应液，所述第二核酸反应液还包括Taq酶、buffer和dNTPs。

8.根据权利要求7所述的试剂盒，其特征在于，所述第二核酸反应液为2×FastFireqPCR PreMix。

9.根据权利要求4所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒的判读标准为：

若RASSF1A基因对应的荧光通道内的荧光曲线呈“S”形且Ct≤37，则判断RASSF1A基因甲基化阳性；若该荧光通道内无典型“S”形扩增，或该荧光通道内Ct37且内参基因对应的荧光通道Ct≤40，则判断RASSF1A基因甲基化阴性；

若TWIST1基因对应的荧光通道内的荧光曲线呈“S”形且Ct≤37，则判断TWIST1基因甲基化阳性；若该荧光通道内无典型“S”形扩增，或该荧光通道内Ct37且内参基因对应的荧光通道Ct≤40，则判断TWIST1基因甲基化阴性；

若ZNF154基因对应的荧光通道内的荧光曲线呈“S”形且Ct≤37，则判断ZNF154基因甲基化阳性；若该荧光通道内无典型“S”形扩增，或该荧光通道内Ct37且内参基因对应的荧光通道Ct≤40，则判断ZNF154基因甲基化阴性。

10.一种用于早筛或预后监测膀胱癌的试剂盒系统，其特征在于，包括如权利要求4至9任一项所述的试剂盒，所述试剂盒系统还包括核酸纯化试剂盒，所述核酸纯化试剂盒包括亚硫酸盐。