[发明专利]一种用于检测橡胶树胶孢炭疽菌的LAMP引物组及其检测方法和应用

权利要求书

1.一种用于检测橡胶树胶孢炭疽菌的LAMP引物组，其特征在于，其包括外引物Tub-F3、外引物Tub-B3、内引物Tub-FIP和内引物Tub-BIP，其中，所述外引物Tub-F3的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示，所述外引物Tub-B3的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示，所述内引物Tub-FIP的核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示，所述内引物Tub-BIP的核苷酸序列如SEQ ID NO.4所示。

2.一种用于检测橡胶树胶孢炭疽菌的试剂盒，包含权利要求1所述的LAMP引物组。

3.根据权利要求2所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒中含包括LAMP反应试剂。

4.根据权利要求1所述的LAMP引物组及权利要求2或3所述的试剂盒在检测橡胶树胶孢炭疽菌中的应用。

5.一种检测橡胶树胶孢炭疽菌的方法，其特征在于，它包括以下步骤：

S1.提取DNA：提取待检测橡胶树胶孢炭疽菌叶片的DNA；

S2.LAMP扩增：将步骤S1提取的DNA为模板，用权利要求1所述的引物组进行LAMP扩增；

S3.结果判定：扩增结束后加入SYBR Green I染液进行荧光染色，若反应管呈现绿色判定为阳性，若呈橙色判定为阴性；或者将反应产物进行琼脂糖凝胶电泳检测，若凝胶电泳图为瀑布状梯形条带即为阳性，反之则为阴性。

6.根据权利要求5所述的一种检测橡胶树胶孢炭疽菌的方法，其特征在于，步骤S2所述LAMP扩增的反应体系为：0.18U·μL Bst-DNA polymerase，4mmol·L^-1Mg²⁺，1mmol·L^-1dNTPs，0.6mol·L^-1甜菜碱，1.6μmol·L^-1内引物FIP和BIP，0.2μmol·L^-1内引物F3和B3，1μL DNA，1μL 10×Bst-DNA Polymerase Buffer，加ddH₂O补足10μL。

7.根据权利要求5所述的一种检测橡胶树胶孢炭疽菌的方法，其特征在于，所述的LAMP扩增在62～64℃条件下进行，反应时间为50～90min。