[发明专利]一种结直肠癌微肿瘤细胞模型的培养方法

权利要求书

1.一种用于培养结直肠癌微肿瘤模型的培养基，由抗菌抗真菌剂三抗、HEPES、GlutaMax、人重组蛋白EGF、人重组蛋白bFGF、人重组蛋白HGF、人重组蛋白Noggin、人重组蛋白R-spondin、人重组蛋白IL-2、人重组蛋白IL-15、SB202190、皮质醇、Forskolin、A83-01、Primocin、N-乙酰-L-半胱氨酸、烟碱、N2 supplement、霍乱毒素、B27、ITS-X、Y-27632和Advanced DMEM/F12培养基组成；

其中，所述抗菌抗真菌剂三抗中的青霉素的终浓度为100-200U/mL；所述抗菌抗真菌剂三抗中的链霉素的终浓度为100-200μg/mL；所述抗菌抗真菌剂三抗中的两性霉素B的终浓度为250-250ng/mL；所述HEPES的终浓度为8-12mM；所述GlutaMax的终浓度为0.8-1.2％(体积百分含量)；所述人重组蛋白EGF的终浓度为10-100ng/mL；所述人重组蛋白bFGF的终浓度为10-50ng/mL；所述人重组蛋白HGF的终浓度为5-25ng/mL；所述人重组蛋白Noggin的终浓度为100-200ng/mL；所述人重组蛋白R-spondin的终浓度为250-500ng/mL；所述人重组蛋白IL-2的终浓度为10-100ng/mL；所述人重组蛋白IL-15的终浓度为10-100ng/mL；所述SB202190的终浓度为5-10μM；所述皮质醇的终浓度为20-50ng/mL；所述Forskolin的终浓度为2-10μM；所述A83-01的终浓度为0.25-1.25μM；所述Primocin的终浓度为1％(体积百分含量)；所述N-乙酰-L-半胱氨酸的终浓度为0.5-2mM；所述烟碱的终浓度为5-10mM；所述N2supplement的终浓度为1％(体积百分含量)；所述霍乱毒素的终浓度为0.1-1nM；所述B27的终浓度为1.5-2.5％(体积百分含量)；所述ITS-X的终浓度为0.8-1.2％(体积百分含量)；所述Y-27632的终浓度为5-20μM；余量均为Advanced DMEM/F12培养基。

2.一种用于培养结直肠癌微肿瘤模型的成套试剂，由权利要求1所述培养基和如下中的全部或部分组成：样本解离液、样本保存液、样本清洗液、细胞消化液、消化终止液和细胞冻存液；

所述样本解离液由胶原酶I、胶原酶II、胶原酶IV和PBS组成；其中，所述胶原酶I的终浓度为150-250U/mL；所述胶原酶II的终浓度为150-250U/mL；所述胶原酶IV的终浓度为150-250U/mL；余量均为PBS；

所述样本保存液由胎牛血清、抗菌抗真菌剂三抗、HEPES和HBSS组成；其中，所述胎牛血清的终浓度为1-5％(体积百分含量)；所述抗菌抗真菌剂三抗中的青霉素的终浓度为100-200U/mL；所述抗菌抗真菌剂三抗中的链霉素的终浓度为100-200μg/mL；所述抗菌抗真菌剂三抗中的两性霉素B的终浓度为250-250ng/mL；所述HEPES的终浓度为8-12mM；余量均为HBSS；

所述样本清洗液由抗菌抗真菌剂三抗和PBS组成；其中，所述抗菌抗真菌剂三抗中的青霉素的终浓度为100-200U/mL；所述抗菌抗真菌剂三抗中的链霉素的终浓度为100-200μg/mL；所述抗菌抗真菌剂三抗中的两性霉素B的终浓度为250-250ng/mL；余量均为PBS；

所述细胞消化液组成如下：每10mL所述细胞消化液中含有4-6mL Accutase，终浓度为5mM的EDTA，1.5-2.5mL TrypLE Express，余量为PBS；

所述消化终止液由胎牛血清、抗菌抗真菌剂三抗和DMEM培养基组成；其中，所述胎牛血清的终浓度为8-12％(体积百分含量)；所述抗菌抗真菌剂三抗中的青霉素的终浓度为100-200U/mL；所述抗菌抗真菌剂三抗中的链霉素的终浓度为100-200μg/mL；所述抗菌抗真菌剂三抗中的两性霉素B的终浓度为250-250ng/mL；余量均为DMEM培养基；

所述细胞冻存液由Advanced DMEM/F12培养基、DMSO和1％甲基纤维素溶液组成；其中，所述Advanced DMEM/F12培养基、所述DMSO和所述1％甲基纤维素溶液的体积配比为20:2:(0.8-1.2)；所述1％甲基纤维素溶液是浓度为1g/100ml的甲基纤维素水溶液。