[发明专利]一种用于鉴别猪源性成分的RPA引物及检测体系和方法

权利要求书

1. 一种用于鉴别猪源性成分的RPA-CRISPR/Cas12a组合物，其特征在于，包括用于鉴别猪源性成分的RPA引物Pig-F/Pig-R、CRISPR/Cas12a蛋白、crRNA探针和带有荧光标记的ssDNA-reporter；所述RPA引物Pig-F/Pig-R的序列如SEQ ID NO.1～2所示，所述crRNA探针的序列如SEQ ID NO.3所示，所述ssDNA-reporter的序列如SEQ ID NO.4所示。

2.权利要求1所述组合物在鉴别猪源性成分或制备鉴别猪源性成分的产品中的应用。

3.一种快速鉴别肉或肉制品中猪源性成分的方法，其特征在于，包括以下步骤：

S1.提取待测样品DNA或直接取样品取裂解液上清；

S2.以步骤S1所得DNA或样品裂解液上清为模板，用权利要求1所述RPA引物Pig-F/Pig-R进行核酸恒温扩增反应；

S3.用权利要求1所述组合物中的crRNA探针、ssDNA-reporter和CRISPR/Cas12a蛋白配制检测体系，加入步骤S2所得扩增产物进行反应；所述ssDNA-reporter的5’端标记有FAM基团，3’端标记有BHQ基团；若在蓝光照射下，空白对照无荧光，阳性对照与所检样品产生绿色荧光，则所检样品中含有猪源性成分。

4.根据权利要求3所述方法，其特征在于，步骤S1中采用CTAB法提取待测样品DNA或采用碱裂解法获得样品裂解液上清。

5. 根据权利要求3所述方法，其特征在于，步骤S2所述核酸恒温扩增反应的反应体系中，引物Pig-F和Pig-R的终浓度为0.56 μM。

6. 根据权利要求3所述方法，其特征在于，步骤S3所述检测体系中，Cas12a的终浓度为1 μM，crRNA探针的终浓度为1 μM，ssDNA-reporter的终浓度为10 μM。

7.根据权利要求5所述方法，其特征在于，反应体系配制完后添加矿物油覆盖液面。

8.一种用于鉴别猪源性成分的试剂盒，其特征在于，含有权利要求1所述RPA-CRISPR/Cas12a组合物。