[发明专利]一种无乳链球菌表面免疫原性重组蛋白及其制备方法与应用

说明书

本发明涉及无乳链球菌表面免疫原性重组蛋白及其制备方法与应用，所述重组蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO:2所示，所述重组蛋白的编码基因的序列如SEQ ID NO:1所示；所述重组蛋白的制备方法即将所述的重组蛋白的编码基因构建到表达载体上，获得重组表达载体；将重组表达载体转化宿主细胞，培养转化的宿主细胞，使转化的宿主细胞表达产生所述无乳链球菌表面免疫原性重组蛋白，之后回收并纯化所表达的无乳链球菌表面免疫原性重组蛋白；所述重组蛋白在制备罗非鱼抗无乳链球菌感染的疫苗中的应用。一种罗非鱼口服纳米疫苗是以所述的无乳链球菌表面免疫原性重组蛋白作为抗原；本发明的纳米疫苗对罗非鱼具有良好的免疫保护效果。

技术领域

本发明属于疫苗和生物制品领域，具体涉及一种无乳链球菌表面免疫原性重组蛋白及其制备方法与应用。

背景技术

罗非鱼是一种重要的经济鱼，在世界水产养殖产量中占有很大的比重。无乳链球菌是一种重要致病菌，其感染宿主包括人、牛、鱼，多年来无乳链球菌严重威胁着罗非鱼养殖业的发展。疫苗因具绿色、安全、高效等优点成为防控鱼类疾病的首要选择的技术。尽管我们对鱼类疫苗的研究不断深入，但是商品化的疫苗种类还较少。由于鱼体不宜注射且生活在开放的水环境中，因此口服免疫是最适用于鱼类的免疫方式。鱼类胃肠道消化酶易对抗原造成破坏，因此，研发能提高疫苗的保护性抗原稳定性和吸收率的佐剂对鱼类口服疫苗具有重要意义。

亚单位疫苗成分稳定，并具有安全高效的特点，是目前新型疫苗开发的热点之一。开发亚单位疫苗的最关键步骤是鉴定“潜在”的保护性抗原，并确认其在宿主物种中对目标病原体的保护性效果。针对罗非鱼无乳链球菌，本研究选择了具有良好免疫原性，高度保守的SIP作为抗原蛋白。从免疫途径来说，传统的注射、浸泡方式难以在水产养殖过程中有效实施，而口服免疫的实施相对便利。口服疫苗开发的主要瓶颈是胃酸环境和肠道丰富水解酶对抗原的降解。为解决这个问题，本研究采用智能化的纳米运载体系对其进行特定环境下的保护和靶向释放，使抗原免于胃肠道水解，并能被肠道中细胞、组织高效吸收和呈递，从而形成全身免疫。应用经济适用的介孔二氧化硅(Mesoporous silica nanoparticles，MSN)纳米材料，对于减少疫苗成本投入和产业化十分迫切。

发明内容

本发明的目的在于提供一种无乳链球菌表面免疫原性重组蛋白及其制备方法与应用；另外，针对罗非鱼无乳链球菌，本发明选择了具有良好免疫原性且高度保守的SIP蛋白作为抗原蛋白，得到了具有高保护率的罗非鱼口服纳米疫苗，该罗非鱼口服纳米疫苗能够刺激罗非鱼产生无乳链球菌特异性抗体，并能够有效提高罗非鱼抗无乳链球菌感染的能力。

本发明的目的通过如下技术方案实现：

本发明提供一种无乳链球菌表面免疫原性重组蛋白(SIP重组蛋白)，所述重组蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO:2所示。

所述的无乳链球菌表面免疫原性重组蛋白的编码基因，所述编码基因的序列如SEQ ID NO:1所示。

本发明还提供一种包含所述编码基因的表达载体。

所述表达载体包括pMD18-T、pET32a等。

由所述的表达载体转化的宿主细胞。

所述宿主细胞包括大肠杆菌BL21、293T细胞、sf9昆虫细胞、DG44、DXB11、CHO-K1或CHO-S细胞株。

本发明还提供所述的无乳链球菌表面免疫原性重组蛋白的制备方法，即将所述的重组蛋白的编码基因构建到表达载体上，获得重组表达载体；将重组表达载体转化宿主细胞，培养转化的宿主细胞，使转化的宿主细胞表达产生所述无乳链球菌表面免疫原性重组蛋白，之后回收并纯化所表达的无乳链球菌表面免疫原性重组蛋白；

所述编码基因是以罗非鱼链球菌SIP蛋白基因序列为模板、SEQ ID No:3和SEQ IDNo:4为引物进行PCR扩增得到的。