[发明专利]一种短链羰基还原酶PpYSDR突变体、编码基因、重组表达载体、基因工程菌及应用

权利要求书

1.一种短链羰基还原酶PpYSDR突变体，其特征在于，所述突变体由短链羰基还原酶PpYSDR野生型的氨基酸序列的第85位甲硫氨酸突变为谷氨酰胺、第88位亮氨酸突变为天冬酰胺、第136位亮氨酸突变为丙氨酸和第143位天冬氨酸突变为丙氨酸后得到；

所述短链羰基还原酶PpYSDR野生型的氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示。

2.根据权利要求1所述的短链羰基还原酶PpYSDR突变体，其特征在于，

所述突变体的氨基酸序列如SEQ ID NO.12所示。

3.如权利要求1所述的短链羰基还原酶PpYSDR突变体的编码基因，其特征在于，所述突变体的编码基因由短链羰基还原酶PpYSDR野生型的编码基因经特异性引物扩增得到，其中：

短链羰基还原酶PpYSDR野生型的编码基因核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示；

所述特异性引物为85Q、88N、136A和143A；

所述特异性引物85Q的核苷酸序列为：

85Q-F gcgtccaaggccccctgccgcaagac；

85Q-R ggggccttggacgcccgcattgacgaatac；

所述特异性引物88N的核苷酸序列为：

88N-F ggccccaacccgcaagacctggagacggtt；

88N-R ttgcgggttggggcccatgacgcccg；

所述特异性引物136A的核苷酸序列为：

136A-F tcgatcgctggcagcgtaaccatccccga；

136A-R gctgccagcgatcgaactcatgaaggccagcacg；

所述特异性引物143A的核苷酸序列为：

143A-F atccccgctgggggcgaaatttgcctgtac；

143A-R gcccccagcggggatggttacgctgccc。

4.根据权利要求3所述的短链羰基还原酶PpYSDR突变体的编码基因，其特征在于，

突变体的编码基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.11所示。

5.一种含有如权利要求3或4所述的突变体的编码基因的重组表达载体。

6.根据权利要求5所述的重组表达载体，其特征在于，所述重组表达载体为质粒、噬菌体或病毒载体。

7.根据权利要求5所述的重组表达载体，其特征在于，所述重组表达载体为质粒pET-30a。

8.一种表达重组羰基还原酶突变体的基因工程菌，其特征在于，所述基因工程菌含有如权利要求3或4所述的突变体的编码基因，或者所述基因工程菌含有如权利要求5或6或7所述的重组表达载体。

9.根据权利要求8所述的基因工程菌，其特征在于，所述基因工程菌为大肠杆菌E.coli BL21。

10.如权利要求1至2任一所述的突变体或者如权利要求3至4任一所述的编码基因或者如权利要求5至7任一所述的重组表达载体或者权利要求8至9任一所述的基因工程菌在以雄烯二酮为底物制备睾酮上的应用。