[发明专利]一种发酵生产白喉毒素CRM197蛋白的菌种培养基、配制方法以及菌种复苏培养方法

权利要求书

1.一种发酵生产白喉毒素CRM197蛋白的菌种培养基，其特征在于，由包括体积比为（1000）：（2-6）：（1-5）：（24-42）的溶液A、溶液B、溶液C和溶液D制成；

每1000mL所述溶液A由包括以下原料制成：酵母提取物 20-32g、酪蛋白氨基酸 7-13g、L-色氨酸 47-58mg、磷酸二氢钾3-8g、氯化钙1-2g；

每100mL所述溶液B由包括以下原料制成：七水硫酸镁 20-24g、β-丙氨酸110-130mg、烟酸107-120mg、庚二酸6.5-10.5mg、五水硫酸铜0.3-1g、五水硫酸锌0.1-0.6g、四水硫酸锰55-90mg、盐酸 2-4mL；

每100mL所述溶液C由包括以下原料制成：L-胱氨酸 15-23g、盐酸 11-24ml；

每100mL所述溶液D由包括以下原料制成：麦芽糖30-55g、氯化钙0.5-2g。

2.根据权利要求1所述的发酵生产白喉毒素CRM197蛋白的菌种培养基，其特征在于，由包括体积比为（1000）：（2）：（1）：（30）的溶液A、溶液B、溶液C和溶液D制成。

3.根据权利要求1所述的发酵生产白喉毒素CRM197蛋白的菌种培养基，其特征在于，每1000mL所述溶液A由包括以下原料制成：酵母提取物 20g、酪蛋白氨基酸 10g、L-色氨酸50mg、磷酸二氢钾 5g、氯化钙 1g；

每100mL所述溶液B由包括以下原料制成：七水硫酸镁 22.5g、β-丙氨酸 115mg、烟酸115mg、庚二酸 7.5mg、五水硫酸铜 0.5g、五水硫酸锌0.2g、四水硫酸锰75 mg、盐酸 3mL；

每100mL所述溶液C由包括以下原料制成：L-胱氨酸 20g、盐酸 20ml；

每100mL所述溶液D由包括以下原料制成：麦芽糖50g、氯化钙0.5g。

4.根据权利要求1所述的发酵生产白喉毒素CRM197蛋白的菌种培养基，其特征在于，所述溶液A、溶液B、溶液C、溶液D均采用50℃-60℃的注射用水加以配制。

5.一种根据权利要求1-4中任意一项所述的发酵生产白喉毒素CRM197蛋白的菌种培养基的配制方法，其特征在于，包括以下步骤：

S1、配制溶液

S1.1、配制溶液A

将酵母提取物、酪蛋白氨基酸、L-色氨酸、磷酸二氢钾、氯化钙用注射用水进行充分混合溶解，再定容至1000ml，得到溶液A；

S1.2、配制溶液B

将七水硫酸镁、β-丙氨酸、烟酸、庚二酸、五水硫酸铜、五水硫酸锌、四水硫酸锰、盐酸用注射用水进行充分混合溶解，再定容至100ml，得到溶液B；

S1.3、配制溶液C

将L-胱氨酸 、盐酸用水进行充分混合溶解，再定容至100ml，得到溶液C；

S1.4、配制溶液D

将麦芽糖、氯化钙用注射用水进行充分混合溶解，再定容至100ml，得到溶液D；

S2、溶液混合

按比例在溶液A中加入溶液B和溶液C，灭菌；冷却后，加入溶液D，然后加入琼脂粉，灭菌分装即可得到菌种培养基。

6.根据权利要求5所述的一种发酵生产白喉毒素CRM197蛋白的菌种培养基的配制方法，其特征在于，S1.1、配制溶液A中，将酵母提取物、酪蛋白氨基酸、L-色氨酸、磷酸二氢钾、氯化钙用注射用水进行充分混合溶解，调节pH至7.4±0.2，再定容至1000ml，得到溶液A。

7.根据权利要求6所述的一种发酵生产白喉毒素CRM197蛋白的菌种培养基的配制方法，其特征在于，S1.1、配制溶液A，将酵母提取物、酪蛋白氨基酸、L-色氨酸、磷酸二氢钾、氯化钙用注射用水进行充分混合溶解，调节pH至7.4±0.2，再定容至1000ml，采用0.45um滤膜进行澄清过滤，得到溶液A。