[发明专利]一种竹子根内生菌的分离鉴定方法

权利要求书

1.一种竹子根内生菌的分离鉴定方法，其特征在于，该方法包括以下步骤：

采集无病虫害的健康且生长良好的毛竹根部作为样品，剪取新鲜健康竹根若干，剪取后立即将所得竹根置于密封袋中保存；

将上述剪取的竹根进行消毒，然后转移到无菌研钵中充分研钵，然后取上清液稀释，将稀释后的上清液200μL分别倒入LB和PDA培养基中培养，将LB培养基至于37℃恒温培养，PDA培养基至于28℃恒温培养；

挑取长势较好菌落用接种灭菌环进行划线培养，从形态特征明显的，典型的单菌落中挑取少量菌体至LB和PDA培养基中，经培养后即为初步分离的毛竹内生菌纯种；

对分离得到的毛竹内生菌进行鉴定。

2.根据权利要求1所述的竹子根内生菌的分离鉴定方法，其特征在于，所述消毒过程为：用自来水对植株表面洗涤4-5次，用经过消毒的纸巾充分吸干水分，首先使用75％乙醇溶液漂洗1min，后用无菌水反复冲洗，再用经过消毒的纸巾充分吸干水分，使用1％次氯酸钠溶液漂洗4min，再次用无菌水冲洗掉次氯酸钠溶液后置于转移至75％乙醇溶液中浸泡30s，最后用无菌水将乙醇溶液冲洗干净，并用无菌试纸将竹根的水分吸干。

3.根据权利要求2所述的竹子根内生菌的分离鉴定方法，其特征在于，取最后1次冲洗的无菌水200μL在LB和PDA培养基上涂布，PDA在28℃、LB在37℃恒温培养，检验消毒灭菌效果。

4.根据权利要求1或3所述的竹子根内生菌的分离鉴定方法，其特征在于，所述LB培养基成分及含量为：0.5～3％大豆蛋白胨、0.2～0.7％酵母粉、0.5～1.2％氯化钠。

5.根据权利要求1或3所述的竹子根内生菌的分离鉴定方法，其特征在于，所述PDA培养基成分及含量为：10％马铃薯、0.05～0.2％酵母粉或膏，0.050～0.2％蛋白豚，0.05～0.2磷酸氢二钾，0.05～0.2％硫酸镁，2％葡萄糖或蔗糖。

6.根据权利要求5所述的竹子根内生菌的分离鉴定方法，其特征在于，所述PDA培养基中还含有抗生素，所述抗生素为硫酸链霉素，浓度为0.1％。

7.根据权利要求1所述的竹子根内生菌的分离鉴定方法，其特征在于，所述上清液按照10^-1、10^-2、10^-3、10^-4、10^-5进行稀释。

8.根据权利要求1所述的竹子根内生菌的分离鉴定方法，其特征在于，所述毛竹内生菌鉴定方法包括：革兰氏染色以及PCR分子鉴定。