[发明专利]一种从人诱导多能干细胞分化为自然杀伤细胞的方法

权利要求书

1.一种从人诱导多能干细胞分化自然杀伤细胞的方法，其特征在于，包含如下步骤：

步骤一：采用人诱导多能干细胞分化形成具有KDR+CD73+表达的内皮祖细胞；

步骤二：所述具有KDR+CD73+表达的内皮祖细胞经内皮-血液转化，形成具有CD34-CD45+表达的NK祖细胞；

步骤三：所述具有CD34-CD45+表达的NK祖细胞进一步分化为具有CD56+CD3-表达的NK细胞。

2.根据权利要求1所述的一种从人诱导多能干细胞分化自然杀伤细胞的方法，其特征在于，所述步骤一中分化所依赖的培养体系为在生物反应器或细胞工厂中接种人诱导多能干细胞。

3.根据权利要求1或2所述的一种从人诱导多能干细胞分化自然杀伤细胞的方法，其特征在于，所述步骤一分化依赖于培养基Ⅰ，所述培养基Ⅰ成份含有细胞因子I；所述细胞因子Ⅰ包括细胞因子组合A与细胞因子组合B；

所述细胞因子组合A为VEGF，bFGF，Activin-A中的至少两种的组合；

所述细胞因子组合B为BMP-4，SCF，IL-3，IL-6，TPO，FLT3L中的至少一种或多种的组合；

所述培养基中各细胞因子Ⅰ的用量VEGF 1-100ng/ml，bFGF 0.25-50ng/ml，Activin-A0.1-20ng/ml，BMP-4 0.3-60ng/ml，SCF 1-200ng/ml，IL-3 0.1-20ng/ml，IL-6 0.1-20ng/ml，TPO 0.1-100ng/ml,FLT3L 0.1-30ng/ml。

4.根据权利要求1或2所述的一种从人诱导多能干细胞分化自然杀伤细胞的方法，其特征在于，所述培养基Ⅰ还含有基础培养基I；所述基础培养基Ⅰ为AIM-V，X-Vivo-10，X-Vivo-15，Optimizer，PRIME-XV，KBM581中的一种或多种按照任意比例的混合。

5.根据权利要求1所述的一种从人诱导多能干细胞分化自然杀伤细胞的方法，其特征在于，所述步骤二中分化所依赖的培养体系为在生物反应器或细胞工厂中接种具有KDR+CD73+表达的内皮祖细胞。

6.根据权利要求1或5所述的一种从人诱导多能干细胞分化自然杀伤细胞的方法，其特征在于，所述步骤二分化依赖于培养基Ⅱ；所述培养基Ⅱ包括细胞因子Ⅱ；所述细胞因子Ⅱ包含细胞因子组合C与细胞因子组合D；

所述细胞因子组合C包含SCF、TPO、FLT3L、IL3或IL6中的一种或多种的组合；

所述细胞因子组合D包含IL7、IL15、IL12、IL18、IL21中的一种或多种的组合；

各细胞因子Ⅱ的用量为SCF 1-200ng/ml，TPO 1-100ng/ml，FLT3L 1-200ng/ml，IL3 1-200ng/ml，IL6 1-100ng/ml，IL7 1-100ng/ml，IL15 1-100ng/ml，IL12 1-100ng/ml，IL181-100ng/ml，IL21 1-100ng/ml。

7.根据权利要求1或5所述的一种从人诱导多能干细胞分化自然杀伤细胞的方法，其特征在于，所述培养基Ⅱ还包括基础培养基Ⅱ；所述基础培养基Ⅱ为AIM-V，X-Vivo-10，X-Vivo-15，Optimizer，PRIME-XV和KBM581中的一种或多种按照不同比例的混合。

8.根据权利要求1所述的一种从人诱导多能干细胞分化自然杀伤细胞的方法，其特征在于，所述步骤三分化所依赖的培养体系为细胞工厂或生物反应器中接种具有CD34-CD45+表达的NK祖细胞。